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食品虫虫

铜虫 (初入文坛)

[求助] 绿脓杆菌平板计数问题 已有1人参与

1.我做的绿脓杆菌(好氧菌、兼性厌氧菌)倾注培养,稀释度做到-8、-9、-10、-11,只记录有明显特征的菌落发现菌落梯度不是很明显,几个梯度做的计数差不多,并且均大于30且不超过300,平板表面有很多可见的大菌落,但是有很多的小点生长培养基内部(附图如下),不确定是否是绿脓杆菌,如果记录,-8、-9、-10三个稀释度的菌落就会超过300,但是由于小点过小,计数十分困难,且培养多久均不能生长成容易计数的菌落。因此我做了小验证试验:将仅有小点的菌落切下一块放入LB培养基中摇瓶培养发现菌液变绿(绿脓杆菌液体摇瓶特征),菌液革兰氏染色也为阴性菌,且显微镜下显示绿脓杆菌特征。
2.请问除了增大稀释度还能如何处理这种情况,上述方法是否能证明小点是绿脓杆菌?计数时是否需要记录这些小点?是否有人做倾注时在其他菌上也有类似情况?
绿脓杆菌平板计数问题
20130904_153323.jpg


绿脓杆菌平板计数问题-1
20130904_153818.jpg


绿脓杆菌平板计数问题-2
20130904_153829.jpg
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加油,笨
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-09-06 22:25:40
食品虫虫: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-09-07 15:44:55
根据我的经验:活化两次(一次固体划线,一次试管活化,35℃,220rpm,16h,培养基为肉汤培养基)的绿脓杆菌10倍稀释7次或8次,取100ul涂板足矣,计算出原菌液的数量级在10的九次方,前面的系数一般在3-6之间。希望能帮到你
爱拼才会赢
3楼2013-09-06 20:56:07
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wmwnyxt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-09-06 22:25:27
食品虫虫: 金币+2, 有帮助 2013-09-07 15:44:42
若是再培养段时间,小点无明显变化(不形成菌落),就无需计数了。
注意下菌液量与倾注量。
Ifyouwanttocatchupwiththepaceoflife,youshouldfullfillyourselfatfirst
2楼2013-09-06 16:32:00
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食品虫虫

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wmwnyxt at 2013-09-06 16:32:00
若是再培养段时间,小点无明显变化(不形成菌落),就无需计数了。
注意下菌液量与倾注量。

会再长一点点,但还是很小啊……
加油,笨
4楼2013-09-07 15:41:20
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食品虫虫

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by anyaxiong at 2013-09-06 20:56:07
根据我的经验:活化两次(一次固体划线,一次试管活化,35℃,220rpm,16h,培养基为肉汤培养基)的绿脓杆菌10倍稀释7次或8次,取100ul涂板足矣,计算出原菌液的数量级在10的九次方,前面的系数一般在3-6之间。希望能帮 ...

我用的不是肉汤,而是优化过的培养基,浓度高一点。肉汤的,我的一般做到八次方。谢谢您的回复。
加油,笨
5楼2013-09-07 15:44:01
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