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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 新人求助 OD标准曲线绘制问题
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小米米沙

金虫 (小有名气)

[求助] 新人求助 OD标准曲线绘制问题

我们都知道用紫外分光光度计做菌体浓度的标准曲线，然后根据标准曲线来求得未知的菌体浓度。但是在标准曲线绘制的时候，如何确定最初的菌浓，即梯度稀释前的浓度，也就是和曲线的横坐标值。不要称重法，因为得到g/ml这个浓度根本没有用处啊，我想知道的是未知菌液的菌体数量，即个/ml。如果用显微计数的话根本就不精确，标准曲线的绘制就没有意义了。很纠结这个问题，希望高人解答！谢谢
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硕博连读的人伤不起啊
1楼 2013-03-13 09:24:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

microxy

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个可能要用平板菌落法计数了  cfu/mL.
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2楼2013-03-13 10:14:28
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wenxu6699

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhangxingc: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流 2013-03-13 11:10:00
要确定菌液中的菌体个数，用平板涂布法最好，即涂布10-3,10-4,10-5, 10-6,10-7,10-8的稀释菌悬液各0.1 mL，放入25℃培养箱内培养72 h。

计数：将培养基置于Colony Counter上，计数并做好记录，菌落数在30~300外的数据弃之不用。
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3楼2013-03-13 10:18:03
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佳佳弗瑞儿

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhangxingc: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流 2013-03-13 11:10:17
OD测的只在一定范围内才有效，对数期后面就不准了，因为OD活菌和死菌一起测了嘛，实际的OD曲线和生长曲线是不一样的，就用稀释涂布呗
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我喂自己袋盐
4楼2013-03-13 10:41:11
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
平板涂布计数法是比较准确的，当然要尝试不同的稀释度。
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6楼2013-03-13 12:37:11
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duhuiyun

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是稀释不同倍数菌液，然后每个浓度涂布三个平板，同时每个浓度的菌液再测OD，这样等平板长好，数一下菌落数求平均值，作为标准曲线的横坐标就可以了。
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8楼2013-03-15 15:46:26
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普通回帖

小米米沙

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wenxu6699 at 2013-03-13 10:18:03
要确定菌液中的菌体个数，用平板涂布法最好，即涂布10-3,10-4,10-5, 10-6,10-7,10-8的稀释菌悬液各0.1 mL，放入25℃培养箱内培养72 h。

计数：将培养基置于Colony Counter上，计数并做好记录，菌落数在30~300外的 ...

那是否我只需将绘制标准曲线时的一个浓度涂布检测数量即可呢？其余的梯度稀释的是否就不用了？
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硕博连读的人伤不起啊
5楼2013-03-13 11:04:13
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deitygl

银虫 (初入文坛)
这位同学想偷懒呢，想知道准确的 个/mL，OD绝对是不靠谱的，就算你做个r平方是1个标曲也没用，还是涂板子吧
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7楼2013-03-13 17:33:05
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wenxu6699

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小米米沙: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-18 09:16:00
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小米米沙 at 2013-03-13 11:04:13
那是否我只需将绘制标准曲线时的一个浓度涂布检测数量即可呢？其余的梯度稀释的是否就不用了？...

有用的，你可以取三个稀释度（最少），例如10-4,10-5,10-6，但要保证相邻稀释度中菌落数不能相差太大，近似符合10倍的比例关系。
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9楼2013-03-15 22:39:55
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dodge1984

铁虫 (小有名气)
乖乖涂布或倾注平板就可以了，不复杂的
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10楼2013-03-19 08:44:23
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