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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求碧云天BCA测标准曲线的OD值
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judyleezy

铜虫 (小有名气)

[求助] 求碧云天BCA测标准曲线的OD值

有用碧云天BCA试剂盒做过标准曲线的筒子吗？
不知道是不是实验室的酶标仪坏了，今年测标准曲线，1mg/ml的BSA对应的OD值竟然是0.709，测了好多次大概都是这个数值。而去年这个时候1mg/ml的BSA对应的OD值是1.1左右的。是不是我们实验室的酶标仪有问题啊？
下面是标准曲线测试过程中各点对应的浓度和OD值
0（0.089）0.05mg/ml（0.152） 0.1mg/ml（0.182）0.2mg/ml（0.253）0.4mg/ml（0.377）0.6mg/ml（0.484）0.8mg/ml（0.605）1.0mg/ml（0.709）
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无怨无悔!
1楼 2012-03-12 17:41:56
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chf11115808

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶标仪的型号，以及你是否使用了最适合的吸收波长？
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Goodcompanyontheroadistheshortestcut
2楼2012-03-30 11:03:00
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2011加油

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每次做的标曲数值都会有一些偏差的，这也是正常的。这跟你加样时操作有关，比如枪尖有时会留有少量蛋白，没有完全加到孔中，造成人为的误差。还有每一次测定时，孵育的时间也有关系。时间稍长一些（超过30min），它的颜色就有可能变得加深了。所以不能保证实验的标曲数据每次均相同。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
3楼2012-03-30 12:52:01
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judyleezy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chf11115808 at 2012-03-30 11:03:00:
酶标仪的型号，以及你是否使用了最适合的吸收波长？

去年和今年用的是同一个酶标仪 波长也没错 562nm 可是1mg/ml的OD值就不对了 我怀疑酶标仪坏了 要是酶标仪坏了测得的浓度是不是就不对了？
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无怨无悔!
4楼2012-04-11 19:15:39
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judyleezy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 2011加油 at 2012-03-30 12:52:01:
每次做的标曲数值都会有一些偏差的，这也是正常的。这跟你加样时操作有关，比如枪尖有时会留有少量蛋白，没有完全加到孔中，造成人为的误差。还有每一次测定时，孵育的时间也有关系。时间稍长一些（超过30min）， ...

我基本会保持孵育时间在30min 每次取20ul也不会错吧 我主要是觉得1mg/ml对应的OD值和以前差太多了
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无怨无悔!
5楼2012-04-11 19:18:18
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2011加油

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
judyleezy: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-04-16 20:12:29
每次都会有偏差，这是正常的，如果相差太大，可以尝试找到较近的两台酶标仪去测定看看啊。比较比较结果，顺便看看样品的OD值是否也因酶标仪的不同，OD值也会有较大变化，原因就很快找到了。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
6楼2012-04-12 19:12:20
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judyleezy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 2011加油 at 2012-04-12 19:12:20:
每次都会有偏差，这是正常的，如果相差太大，可以尝试找到较近的两台酶标仪去测定看看啊。比较比较结果，顺便看看样品的OD值是否也因酶标仪的不同，OD值也会有较大变化，原因就很快找到了。

主要是附近没有第二台酶标仪 所以想来这里看看最近论坛里有人做过标准曲线没
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无怨无悔!
7楼2012-04-13 19:03:11
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yanfang2012

木虫 (著名写手)
请问楼主标曲里空白对照的吸光度变大了吗？如果都变大并不影响结果。可能是你两次用的96孔板本身吸光度差别比较大
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believe yourself！
8楼2013-03-05 11:37:02
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by judyleezy at 2012-04-11 19:18:18
我基本会保持孵育时间在30min 每次取20ul也不会错吧 我主要是觉得1mg/ml对应的OD值和以前差太多了...

孵育的温度也一样吗，虫子 2011加油 的解释是讲得通的，OD值的差异，如果说你仪器是没有问题的话，就说明BCA和你样品的反应程度一样，导致颜色深度的变化，BCA和你样品的反应程度取决于反应时间和反应温度，你看看这两次的实验室条件是不是完全一致
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2013-03-05 18:22:23
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bao可雅

新虫 (小有名气)
也可能温度，这个od值变化的确有的，不过线性好不好，如果好的话，可以看看线性的斜率和以前一样吗，如果差距不大的话，可以继续使用，酶标仪坏的可能性不大
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10楼2015-01-21 15:06:04
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