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蓝冰天山

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于EMSA实验的几点问题 已有1人参与

现在在做EMSA实验,用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳,用银染染核酸,看不到迁移率的变化,可能是银染灵敏度低的原因,现在想做地高辛标记,地高辛再做探针再杂交的话比较麻烦,
1 可不可以像32P那样,把地高辛标记在将聚丙烯酰胺胶干燥,然后直接显色?
2 把地高辛标记在哪比较好,通过PCR标记上去,还是片段末端?
3 跑了聚丙烯酰胺胶然后做southern有没有人做过,我看southern都是琼脂糖转膜,聚丙稀铣胺能转膜吗?

[ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ]
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用过生物素标记的探针。跑完胶后转移到尼龙膜上,这步骤跟western转膜类似,用的是TBE缓冲液。

紫外交联后,封闭膜,用HRP标记的亲和素检测,就跟western孵抗体一样。

有多家公司都有试剂盒,你可以查一下。
2楼2014-05-05 13:31:16
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