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蓝冰天山

银虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 278.1
散金: 30
帖子: 12
在线: 2.3小时
虫号: 1547810
注册: 2011-12-22
专业: 环境微生物学

[求助] 关于EMSA实验的几点问题已有1人参与

现在在做EMSA实验，用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳，用银染染核酸，看不到迁移率的变化，可能是银染灵敏度低的原因，现在想做地高辛标记，地高辛再做探针再杂交的话比较麻烦，
1 可不可以像32P那样，把地高辛标记在将聚丙烯酰胺胶干燥，然后直接显色？
2 把地高辛标记在哪比较好，通过PCR标记上去，还是片段末端？
3 跑了聚丙烯酰胺胶然后做southern有没有人做过，我看southern都是琼脂糖转膜，聚丙稀铣胺能转膜吗？

[ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ]

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1楼 2013-09-04 15:12:01

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wangpeng227

木虫 (小有名气)

应助: 68 (初中生)
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虫号: 448896
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性别: GG
专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

用过生物素标记的探针。跑完胶后转移到尼龙膜上，这步骤跟western转膜类似，用的是TBE缓冲液。

紫外交联后，封闭膜，用HRP标记的亲和素检测，就跟western孵抗体一样。

有多家公司都有试剂盒，你可以查一下。

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