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樱雪诺风

银虫 (小有名气)

[求助] 求助双向电泳问题分析

双向跑的人血清蛋白，银染后的图，求解解决方法！
求助双向电泳问题分析
2013-08-29.jpg
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1楼 2013-08-30 15:04:42
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
樱雪诺风: 金币+3 2013-11-01 08:46:39
上面和下面的是一起跑的吗？你这个15%的胶吗？血清中有高丰度蛋白，你提取的时候去除了吗？如果没去除的话想想办法去下，不过会有部分的蛋白损失。
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2楼2013-09-04 10:09:47
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by DBWJ at 2013-09-04 10:09:47
上面和下面的是一起跑的吗？你这个15%的胶吗？血清中有高丰度蛋白，你提取的时候去除了吗？如果没去除的话想想办法去下，不过会有部分的蛋白损失。

这个是12%的胶，像白蛋白之类的我没有去除，这个是导致这样结果的主要原因？
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3楼2013-09-11 15:39:43
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
樱雪诺风: 金币+2 2013-11-01 08:46:34
按你这个胶上面来开，不去也行，你上面的那个胶是不是没跑完？3块一起跑的吗？是考染还是银染啊？你给的信息不多，而且胶也不是扫描仪扫出来的不是特别的清晰，无从下手啊
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4楼2013-09-12 14:34:39
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by DBWJ at 2013-09-12 14:34:39
按你这个胶上面来开，不去也行，你上面的那个胶是不是没跑完？3块一起跑的吗？是考染还是银染啊？你给的信息不多，而且胶也不是扫描仪扫出来的不是特别的清晰，无从下手啊

3个是一起跑的，用的是银染，
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5楼2013-09-22 10:17:54
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
樱雪诺风: 金币+5 2013-11-01 08:46:28
你是不是想要胶上面的点多一些？
其实胶点多不多其实和样品有关，如果样品本身蛋白种类少，点少很正常。
还有就是如果你想要低丰度的点多一些的话，你可以尝试去除下血清中的高丰度蛋白，这样的话同样的上样量的话低丰度蛋白就能更多一些。
还有就是你的跑胶的时候是溴酚蓝那条线到底的时候停的吗？图上看感觉才跑一半就停了。
聚焦不好的话可以延长一下聚焦的时间
你上样量是多少？胶条是线性还是非线性的？pH是多少？加完水化液之后DTT含量是多少买M？聚焦条件是什么样的？
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6楼2013-09-26 13:07:07
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by DBWJ at 2013-09-26 13:07:07
你是不是想要胶上面的点多一些？
其实胶点多不多其实和样品有关，如果样品本身蛋白种类少，点少很正常。
还有就是如果你想要低丰度的点多一些的话，你可以尝试去除下血清中的高丰度蛋白，这样的话同样的上样量的话 ...

胶条都用非线性，ph3-10 ，上样125μl 65mMDTT
条件使15000vhr  4000v
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7楼2014-03-25 16:03:50
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