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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR割胶纯化问题
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nan_scc520

银虫 (正式写手)

[交流] PCR割胶纯化问题 已有2人参与

最近采用1073R和RL1做引物进行PCR后割胶纯化，发现目的条带上面有一条不太亮的杂带，虽然暗，但是还是能够看出来的
求教各位的大神这是怎么回事

[ 来自小组 骷髅党 ]
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tomorrowisanotherdayornothingthanthefirstkiss
1楼 2013-08-28 09:43:26
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susan小水

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我进行了二次纯化  但是还是有杂带   我的pcr条件优化了两个月  也感觉优化不出来单一的带  也很纠结
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原谅我一生，放纵不羁爱自由
4楼2013-08-29 09:53:30
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lecou

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-28 13:52:44
这个问题我也遇到过，pcr产物浓度太高的时候，跑胶之后可能会在混杂一些杂带，不容易分开。但是纯化之后DNA浓度降低，就比较容易分开，所以会出现弱杂带。我一般都忽略不计，它浓度极低，并且构建重组质粒后还是要测序，也可以排除杂带问题。
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希望自己能平常心面对实验中的种种
2楼2013-08-28 12:36:20
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nan_scc520

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lecou at 2013-08-28 12:36:20
这个问题我也遇到过，pcr产物浓度太高的时候，跑胶之后可能会在混杂一些杂带，不容易分开。但是纯化之后DNA浓度降低，就比较容易分开，所以会出现弱杂带。我一般都忽略不计，它浓度极低，并且构建重组质粒后还是要测 ...

我后续想做焦磷酸测序，有杂带的话对后续影响很大啊
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tomorrowisanotherdayornothingthanthefirstkiss
3楼2013-08-28 14:14:10
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nan_scc520

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by susan小水 at 2013-08-29 09:53:30
我进行了二次纯化  但是还是有杂带   我的pcr条件优化了两个月  也感觉优化不出来单一的带  也很纠结

今天又改进了实验条件，貌似很成功了
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tomorrowisanotherdayornothingthanthefirstkiss
5楼2013-08-29 14:11:40
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