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自然_法则

银虫 (初入文坛)

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[交流] 克隆技术

图为克隆后结果检测。
孔一：PET28a超螺旋质粒
孔二：连接了目的片段（大约增加1000bp）后PET28a超螺旋质粒
孔三：PET28a双酶切后开链质粒，大约5360bp
孔四五六七：均为连接了目的片段后PET28a双酶切后开链质粒
孔八：10000marker，依次为10000，7500，5000,3000等
我的连接了目的片段后的PET28a质粒样品已经用PCR检测过，结果确实扩增出来了目的片段，表面目的片段连接导入成功，可是为什么双酶切后只有一条带，而看不到大约1000的目的条带呢？？？希望大家都来看看，帮忙分析下原因，还望各位高手指教

13.8.27PET28a质粒以及酶切产物.jpg

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1楼 2013-08-27 12:23:55

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自然_法则

银虫 (初入文坛)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by Da果冻 at 2013-08-30 16:24:21
1.你酶切的质粒浓度太低，你可以多酶切一点，并把上样量加大，尽量多都跑电泳，看看有没有
2.你可以直接拿其中一个连上的质粒去送测序，测序有的话肯定就没问题了
3.你的未酶切质粒怎么会就一条带啊，我的有三条的 ...

恩恩对啊可以送去测序谢谢
未酶切的质粒用的试剂盒提取的，由于没有断裂所以都是超螺旋状态，就只有一条带，其实也有三条，只是上面还有两条量很少，看不到