24小时热门版块排行榜    

查看: 1182  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

自然_法则

银虫 (初入文坛)


[交流] 克隆技术

图为克隆后结果检测。
孔一:PET28a超螺旋质粒
孔二:连接了目的片段(大约增加1000bp)后PET28a超螺旋质粒
孔三:PET28a双酶切后开链质粒,大约5360bp
孔四五六七:均为连接了目的片段后PET28a双酶切后开链质粒
孔八:10000marker,依次为10000,7500,5000,3000等
    我的连接了目的片段后的PET28a质粒样品已经用PCR检测过,结果确实扩增出来了目的片段,表面目的片段连接导入成功,可是为什么双酶切后只有一条带,而看不到大约1000的目的条带呢???希望大家都来看看,帮忙分析下原因,还望各位高手指教
克隆技术
13.8.27PET28a质粒以及酶切产物.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

自然_法则

银虫 (初入文坛)


恩 好的 我试下 谢谢
3楼2013-08-27 16:24:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
自然_法则: 金币+5 2013-08-27 16:23:26
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-27 17:13:45
你的克隆浓度太低,大片段就这么暗,小片段有可能看不到。你可以增加上样量,或者试试用单酶切看是否比空载体单酶切的片段要大。
2楼2013-08-27 12:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weithermo

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
自然_法则: 金币+2 2013-09-02 10:16:28
除了上面同学说的外,你应该可以和载体本身做对照的PCR反应看出差别。另外用低一点浓度的琼脂糖胶跑长时间些,看看1和2 道的差别 (在量相近时应该看出电泳速度不同)。
5楼2013-08-28 01:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆粑

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议低电压时间跑长点,另外确保PCR个溶液没有被污染。
6楼2013-08-29 17:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +5 瞬息宇宙 2026-09-01 11/550 2026-09-02 14:15 by simwe390
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
请填处理意见