应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆技术
91/1返回列表
查看: 1204  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

自然_法则

银虫 (初入文坛)

[交流] 克隆技术

图为克隆后结果检测。
孔一：PET28a超螺旋质粒
孔二：连接了目的片段（大约增加1000bp）后PET28a超螺旋质粒
孔三：PET28a双酶切后开链质粒，大约5360bp
孔四五六七：均为连接了目的片段后PET28a双酶切后开链质粒
孔八：10000marker，依次为10000，7500，5000,3000等
    我的连接了目的片段后的PET28a质粒样品已经用PCR检测过，结果确实扩增出来了目的片段，表面目的片段连接导入成功，可是为什么双酶切后只有一条带，而看不到大约1000的目的条带呢？？？希望大家都来看看，帮忙分析下原因，还望各位高手指教
克隆技术
13.8.27PET28a质粒以及酶切产物.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-08-27 12:23:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
自然_法则: 金币+5 2013-08-27 16:23:26
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-27 17:13:45
你的克隆浓度太低，大片段就这么暗，小片段有可能看不到。你可以增加上样量，或者试试用单酶切看是否比空载体单酶切的片段要大。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-27 12:59:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

自然_法则

银虫 (初入文坛)
恩 好的 我试下 谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-27 16:24:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
good
回复此楼
4楼2013-08-27 17:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weithermo

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
自然_法则: 金币+2 2013-09-02 10:16:28
除了上面同学说的外，你应该可以和载体本身做对照的PCR反应看出差别。另外用低一点浓度的琼脂糖胶跑长时间些，看看1和2 道的差别 （在量相近时应该看出电泳速度不同）。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-08-28 01:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆粑

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议低电压时间跑长点，另外确保PCR个溶液没有被污染。
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-29 17:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Da果冻

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
自然_法则: 金币+2 2013-09-02 10:19:39
1.你酶切的质粒浓度太低，你可以多酶切一点，并把上样量加大，尽量多都跑电泳，看看有没有
2.你可以直接拿其中一个连上的质粒去送测序，测序有的话肯定就没问题了
3.你的未酶切质粒怎么会就一条带啊，我的有三条的
4.你可以做两组单酶切，看看是不是比你的空质粒要大1000bp
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-08-30 16:24:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

自然_法则

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weithermo at 2013-08-28 01:06:45
除了上面同学说的外，你应该可以和载体本身做对照的PCR反应看出差别。另外用低一点浓度的琼脂糖胶跑长时间些，看看1和2 道的差别 （在量相近时应该看出电泳速度不同）。

恩  好的  谢谢
回复此楼
8楼2013-09-02 10:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

自然_法则

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Da果冻 at 2013-08-30 16:24:21
1.你酶切的质粒浓度太低，你可以多酶切一点，并把上样量加大，尽量多都跑电泳，看看有没有
2.你可以直接拿其中一个连上的质粒去送测序，测序有的话肯定就没问题了
3.你的未酶切质粒怎么会就一条带啊，我的有三条的 ...

恩恩 对啊 可以送去测序  谢谢
未酶切的质粒用的试剂盒提取的，由于没有断裂所以都是超螺旋状态，就只有一条带，其实也有三条，只是上面还有两条量很少，看不到
赞一下 回复此楼
9楼2013-09-02 10:19:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 自然_法则 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-02 06:20 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-02 06:13 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 06:13 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 13/650 2026-11-02 06:03 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 06:00 by xzcv0Tehd8lQ
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 9/450 2026-11-02 05:54 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 21/1050 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 03:13 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:05 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:11 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 21:45 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 19:50 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:48 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 3/150 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 5/250 2026-11-01 12:51 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭