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susan小水

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于毛细管电泳---急！！！

我跑pcr之后经过酶切出几天带，做PCR-RFLP,想精确的知道这四五条条带的长度，公司说用毛细管电泳可以做，让我用有荧光标记的dNTP加到pcr管里，然会在毛细管电泳根据荧光测出来。可是查不到荧光标记的，有文献用sybr green1 然后的dna就可以上样电泳，请问哪位亲们知道怎么回事，指条名路。
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原谅我一生，放纵不羁爱自由
1楼 2013-08-16 21:27:47
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aquemarine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
荧光标记的dNTP可能可以从生工订到，这的确是最方便的方法；
sybr green1 是dsDNA嵌入式非共价染料，dsDNA的长度越长，荧光信号越强。做CE时要注意这一点。
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守候健康 等待平安归来！
2楼2013-08-17 16:29:46
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susan小水

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aquemarine at 2013-08-17 16:29:46
荧光标记的dNTP可能可以从生工订到，这的确是最方便的方法；
sybr green1 是dsDNA嵌入式非共价染料，dsDNA的长度越长，荧光信号越强。做CE时要注意这一点。

非常感谢您！请问您在线吗，还有一些问题希望交流一下。那我在酶切之前的pcr条件已经摸好了，用的是mix，那么再再体系中加入荧光标记的dNTP 会使量太多影响pcr吗？之后还有酶切，荧光的东西能在外面裸露吗？会污染环境的吧。应为我上CE还要将酶切之后的产物寄给公司才行。还是公司直接给我pcr之后上机比较靠谱？要是用sybr的话，跟荧光差异大不大，在哪步加比较好呢？谢谢！
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原谅我一生，放纵不羁爱自由
3楼2013-08-17 22:21:25
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