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happyheleny

铜虫 (初入文坛)

[求助] 构建载体问题

现有未知的双质粒。PCR能够扩增出100bp和2kb的片段,这两对引物已经知道。通过测序2Kb序列能够知道质粒是什么么?如果能,怎么做?
请各位高手给予指点!!!
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
happyheleny: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-08-13 15:11:32
小丹木木: 金币+2, 鼓励 应助 2013-08-13 17:22:59
未知的双质粒?不知道是完全没有信息还是知道其中一部分信息?如果完全没有信息,不知道你扩增的意义在哪里?如果你能扩增出上述两个目的片段,通过测序知道核苷酸序列,利用NCBI blast比对看看是否能找出载体信息,据我所知,如果你非要按照你描述的这种情况知道这个载体信息,就只有这一种办法。
2楼2013-08-13 13:45:01
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happyheleny

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huguangdong at 2013-08-13 13:45:01
未知的双质粒?不知道是完全没有信息还是知道其中一部分信息?如果完全没有信息,不知道你扩增的意义在哪里?如果你能扩增出上述两个目的片段,通过测序知道核苷酸序列,利用NCBI blast比对看看是否能找出载体信息, ...

好的,谢谢。基本是完全没信息,就是很久前构建的,克隆2k片段用于制作marker很好用,但是大家都不记得以前怎么构建的了,用的什么载体。
3楼2013-08-13 15:14:20
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happyheleny

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huguangdong at 2013-08-13 13:45:01
未知的双质粒?不知道是完全没有信息还是知道其中一部分信息?如果完全没有信息,不知道你扩增的意义在哪里?如果你能扩增出上述两个目的片段,通过测序知道核苷酸序列,利用NCBI blast比对看看是否能找出载体信息, ...

我只知道100bp和2kb左右的引物,测序的话,测多长的呢?测那个2kb的意义大么?
4楼2013-08-13 15:17:26
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