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小墨825新虫 (小有名气)
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急求网上膜蛋白提取方法的文献来源！！！
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3. 从新鲜样品中提取疏水性膜蛋白（Triton X-114去污剂法） 1) 配制疏水性蛋白提取液（非裂解液）：1% Triton X-114，150mM NaCl, 10mM Tris-HCl，1mM EDTA，调pH值至8.0备用。 2) 菌液于4℃条件下15000g离心15min收集菌体；用1ml 含有5mM MgCl2 的PBS洗涤3次，最后于4℃条件下15000g离心15min收集菌体。 3) 菌体沉淀加入1ml冷提取液，于4℃条件下放置2h，17000g离心10min，去除沉淀取上清。 4) 将上述上清中的Triton X-114含量增加到2%，再加入20mM的CaCl2抑制部分蛋白酶活性，37℃条件下放置10min使其分层。室温下1000g离心10min使液相和去污相充分分层。 5) 将液相和去污相分开，分别用10倍体积的冷丙酮在冰上沉淀45min。 6) 于4℃条件下17000g离心30min，用去离子水洗涤沉淀3次。 7) 将沉淀溶解在1% SDS溶液中，测定蛋白浓度，比较液相和去污相中蛋白提取效率，一般是去污相中疏水性膜蛋白较多，适于进一步蛋白实验。 8) SDS-PAGE进一步分析液相和去污相的蛋白图谱。 急求这个方法的文献来源 是否可靠！？ |
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