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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 四天坏一根色谱柱
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spygzz

新虫 (初入文坛)

[交流] 四天坏一根色谱柱

我做的一个新药品种，3+6类，原料药是3类，制剂6类，原料药方法是参考制剂方法并改进，制剂方法是：0.05mol/L磷酸氢二钾调（ph6.0）：乙腈=65：35。原料药有关物质方法是：0.05mol/L磷酸二氢钾（ph5.6）（A）：乙腈(C)。0min,A:C=65：35，30min,A:C=40：60，40min,A:C=40：60，45min,A:C=65：35，60min,A:C=65：35。各个杂质对照峰都能很好分开。柱子是岛津ODS C18柱，4.6*250mm，5um。第一根柱子大概用了三周，基本上一夜之间柱效降了一半，因为头一天柱效为20000多，第二天就只有8000，且分离度也降了很多，有可能跟那天连续运行了24个小时有关系。第二根色谱柱只用了4天，第一天进的定量限溶液八针，柱效很好，分离液很好，由于重现行不好，在三十多分钟总有怪峰，后面进了8针空白溶液，也不能重现，用异丙醇冲系统6h，再次进8针空白样品并进了系统适用性样品，发现柱效严重降低，只有7000了，峰型完全要不得了。这个柱子损坏太快了，能不能帮我分析一下原因，并想个解决办法。（注，制剂做含量，用的制剂方法，柱子除了长短不一样，其他的都一样，制剂含量用得150cm柱子，用了近一个月，没有任何问题）
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1楼 2013-08-03 17:40:13
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pipwang

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有缓冲盐的流动相，实验结束后，是否用5%甲醇水冲洗了？
三十多分钟有怪峰，跑个基线看看

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-08-04 11:12:46
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浮生曲

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
spygzz: 金币+1 2013-08-14 13:09:16
有两个方面，一个是柱子保养问题，每次走完样品后，是否用低比例有机相如10%甲醇水冲柱子，并且和纯甲醇梯度冲洗，二是样品是什么样子的，怎么处理的？可以加个预柱看看。
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3楼2013-08-04 12:23:12
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spygzz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pipwang at 2013-08-04 11:12:46
有缓冲盐的流动相，实验结束后，是否用5%甲醇水冲洗了？
三十多分钟有怪峰，跑个基线看看

试验完5%甲醇水冲洗40-60min，样品就是几个杂质溶液剂原料药样品，都是过滤过的。
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4楼2013-08-04 14:16:30
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hirose

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by spygzz at 2013-08-04 14:16:30
试验完5%甲醇水冲洗40-60min，样品就是几个杂质溶液剂原料药样品，都是过滤过的。...

岛津的ODS柱不能用这么高的水相冲洗的，柱子被破坏了。
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5楼2013-08-04 15:10:08
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spygzz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hirose at 2013-08-04 15:10:08
岛津的ODS柱不能用这么高的水相冲洗的，柱子被破坏了。...

那一般用10%的甲醇水吗，而且也没有用几天啊，最多冲柱冲甲醇水的时间几天加起来才4h
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6楼2013-08-04 15:14:52
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古可ぷ

荣誉版主 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以跟色谱柱生产商联系
把你的流动相给他们，他们会给出适应的柱子
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7楼2013-08-04 15:46:49
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kuanghua

铜虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
样品性质和溶媒是否有考虑呢？
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8楼2013-08-05 19:55:49
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1845221

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先要考虑是不是样品把你柱子搞挂了，这样的流动相一般伤不了柱子，，柱效下降你的柱压是怎么变的？柱压变低判断就是硅胶坍塌了，柱压变高判断就是堵了。你先告诉我你的症状吧！
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9楼2013-08-05 23:58:24
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duliuhui

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦。 2013-08-08 08:54:13
看流动相应该不怎么伤柱子。你每天都有5%甲醇水冲洗，还用纯甲醇或乙腈冲过柱子吗？每次结束用纯溶剂冲洗下对柱子比较好，可以使C18链舒展，保持良好的柱效。
原料工艺里有没有特殊的物质，或者极端的PH值，有可能因为这些导致柱子的失效。
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10楼2013-08-06 09:17:19
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caff

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦。 2013-08-08 08:54:54
你这流动相盐浓度也不高，pH也不极端，不应该这么伤吧，你样品和稀释剂有什么特殊吗，样品有过滤吗，另5%的甲醇有点太低了吧，至少要10%吧，先10%把盐冲干净再过度到100%甲醇冲，纯甲醇保存~
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11楼2013-08-06 09:50:55
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碧盈儿

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
spygzz: 金币+1 2013-08-06 11:26:29
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦。 2013-08-08 08:55:34
你的高校液相色谱仪的泵的比例阀应该没问题哈？泵的机理是先混合后高压哈？不是先高压再混合？而且有在线过滤装置哈？否则的话，我怀疑是你的泵影响了你的色谱柱寿命。建议你换台仪器，或者将这个梯度，等比例的折算一下，尽量不要用A/C分别为纯无机或有机相。
我也接触过质量不好的磷酸二氢钾，也建议你换个大厂家的试试，你的缓冲盐的pH应该是用稀磷酸调pH得到哦，可以对比一下，是不是跟以前调节所用的磷酸的量不一致。我试验过比你的流动相还多两个离子对试剂，其他基本相同，有机比例还高的，用的依利特的色谱柱，每天24小时连轴转，每40h左右梯度冲洗一遍系统，共试验了27天，所用色谱柱也没出现你这个问题。包括柱压都没有明显变化。
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12楼2013-08-06 10:30:52
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spygzz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by caff at 2013-08-06 09:50:55
你这流动相盐浓度也不高，pH也不极端，不应该这么伤吧，你样品和稀释剂有什么特殊吗，样品有过滤吗，另5%的甲醇有点太低了吧，至少要10%吧，先10%把盐冲干净再过度到100%甲醇冲，纯甲醇保存~

稀释剂就其乙腈水，没有什么特别的，一般推荐磷酸盐浓度小于20mM，感觉盐浓度还是有点大

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13楼2013-08-06 11:10:43
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spygzz

新虫 (初入文坛)
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12楼: Originally posted by 碧盈儿 at 2013-08-06 10:30:52
你的高校液相色谱仪的泵的比例阀应该没问题哈？泵的机理是先混合后高压哈？不是先高压再混合？而且有在线过滤装置哈？否则的话，我怀疑是你的泵影响了你的色谱柱寿命。建议你换台仪器，或者将这个梯度，等比例的折算 ...

磷酸二氢甲显酸性，用氢氧化钾调的ph.你的柱子也太耐用了，我的第一根柱子就是连续用了24小时就不行了或许是刚好到了寿命临界点，很像冲塌了，因为峰后面就像有个很大的杂质没有分开，

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14楼2013-08-06 11:16:59
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spygzz

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by duliuhui at 2013-08-06 09:17:19
看流动相应该不怎么伤柱子。你每天都有5%甲醇水冲洗，还用纯甲醇或乙腈冲过柱子吗？每次结束用纯溶剂冲洗下对柱子比较好，可以使C18链舒展，保持良好的柱效。
原料工艺里有没有特殊的物质，或者极端的PH值，有可能 ...

肯定纯有机相冲洗过，考虑到有个杂质成分不易溶于乙腈水，易溶于乙醇，不知道有没有影响。

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15楼2013-08-06 11:25:54
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spygzz

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 1845221 at 2013-08-05 23:58:24
先要考虑是不是样品把你柱子搞挂了，这样的流动相一般伤不了柱子，，柱效下降你的柱压是怎么变的？柱压变低判断就是硅胶坍塌了，柱压变高判断就是堵了。你先告诉我你的症状吧！

柱压变高了，从1260变到1580，后冲洗色谱柱压力恢复到正常，还有压力降到1100，但是柱效还是3

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16楼2013-08-06 11:33:08
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碧盈儿

铜虫 (小有名气)
★
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14楼: Originally posted by spygzz at 2013-08-06 11:16:59
磷酸二氢甲显酸性，用氢氧化钾调的ph.你的柱子也太耐用了，我的第一根柱子就是连续用了24小时就不行了或许是刚好到了寿命临界点，很像冲塌了，因为峰后面就像有个很大的杂质没有分开，
...

刚才晕了，直接这样说吧，我用过天津永大的磷酸二氢钾其配置的0.05mol/L溶液pH为大约2左右，而正常情况下为4.5左右。
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17楼2013-08-06 11:39:14
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碧盈儿

铜虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
14楼: Originally posted by spygzz at 2013-08-06 11:16:59
磷酸二氢甲显酸性，用氢氧化钾调的ph.你的柱子也太耐用了，我的第一根柱子就是连续用了24小时就不行了或许是刚好到了寿命临界点，很像冲塌了，因为峰后面就像有个很大的杂质没有分开，
...

你也感觉是色谱柱塌了，塌的更可能的原因是析晶的固体颗粒造成的。有流动相造成的析晶，也有可能是样品溶液注如流动相以后造成的析晶等。
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18楼2013-08-06 11:42:49
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spygzz

新虫 (初入文坛)
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17楼: Originally posted by 碧盈儿 at 2013-08-06 11:39:14
刚才晕了，直接这样说吧，我用过天津永大的磷酸二氢钾其配置的0.05mol/L溶液pH为大约2左右，而正常情况下为4.5左右。...

我配的也是4.5左右，呵呵

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19楼2013-08-06 14:01:23
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liuju1216

至尊木虫 (职业作家)
门鸟
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20楼2013-08-06 14:52:22
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season987

禁虫 (初入文坛)
★
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21楼2013-08-06 16:08:04
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hanxizhen

木虫 (著名写手)
★
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你的问题让人很是纠结啊，如果用相同的流动相走别的样品，看看柱效如何，或者用其他的流动相走你的样品，看看柱效如何，应该就可以知道是什么问题了
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22楼2013-08-06 16:11:08
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chibby

银虫 (小有名气)
★
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异丙醇虽然洗脱效果好,但是黏度太大,要稀释好几倍才能拿来冲柱子,否则柱压太高,容易损坏柱子,你的柱子可能是被异丙醇弄坏的,这只是我的建议.
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23楼2014-01-24 14:39:36
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