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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 伤不起的氨基柱啊
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喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方

[求助] 伤不起的氨基柱啊

参考USP34-NF检测某物质含量：用4.6mmX150mm,5um氨基柱，流速1.5ml/min,(20mM磷酸氢二钾+0.25%氨水+磷酸调节PH=7.5)-乙腈=30-70，进样量20uL,柱温40℃，检测波长195nm；样品浓度1mg/ml(用50%乙腈溶解）。买了菲罗门短柱一根，用了7天，主峰峰宽由0.15变为0.5，理论塔板数由3000下降为600.
每次用之前90%水-乙腈冲洗40min,换90%乙腈-水冲30min,换30%水-乙腈冲30min,再上流动相冲50min,开始进样品。用完以后90%水-乙腈冲洗1h,再90%乙腈-水冲洗40min,保存。
后来试过热电的250mm 氨基柱；用了大概一个月也出现了类似的问题，柱效下降，基线抖动非常厉害。
特来请教一下各位，有没有人做过，用什么柱子比较好？抑或问题可能出在哪里？该如何解决比较好妥当？
在此谢过各位！

[ Last edited by 喵喵与咩咩 on 2013-1-5 at 11:11 ]
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生命不息，奋斗不止
1楼2013-01-05 11:09:43
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hzjd1997

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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从头开始: 金币+1, 感谢参与 2013-01-05 16:55:56
喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 流动相中含有缓冲盐，不用大比例的水相怎么可以冲洗干净呢？不知道您有什么建议呢？ 2013-01-05 21:30:50
你冲柱的方法有问题，冲洗氨基柱流动相中有机相不能低于40%，氨基柱本来就是正相柱，水量高了容易坏
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2楼2013-01-05 16:39:55
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古可ぷ

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主优秀版主
楼主莫非做的是缬沙坦
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非吾小天下，才高而已；非吾纵古今，时赋而已；非吾睨九州，宏观而已；三非焉罪？无梦至胜
3楼2013-01-05 18:09:40
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sunxiaoyang010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 看来水相太高了。柱子用完我就保存在90%乙腈里面的，异丙倒是没有用来冲洗和保存醇 2013-01-05 21:04:15
痴夷子皮: 金币+1, 3Q ，欢迎常来哦。 2013-01-06 08:19:37
氨基柱本来就比较脆弱的，水相不能高，一般30%就算很高了。柱子用完了，过度之后，可以用异丙醇冲洗保存，下次使用时候还要注意过渡。 即使是这样，我之前一个项目也用了3-4根，虽然柱效下降没你的厉害，但是我的杂质分不开了，只好买新的。菲罗门的。
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4楼2013-01-05 18:29:33
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lilylily111

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 说明书我看过的，我冲洗方法问题不大。不知道您说的一种氨基柱是哪个牌子的？可否告知一下？谢谢！ 2013-01-05 21:05:29
痴夷子皮: 金币+1, 3Q ，欢迎常来哦。 2013-01-06 08:19:42
我做过一个氨基酸的项目 确实氨基柱的冲柱子的方法  你可以好好看下说明书
我们一个项目也要好多柱子 但后来摸索到一种氨基柱 很好用 你可试试
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smile
5楼2013-01-05 20:28:23
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 这些资料，我基本都看过，也试过其中几个方法，再生基本无效；反冲也是枉然 2013-01-06 11:05:08
关于氨基柱的保养：
像楼主这种情况，氨基柱作反相使用时，操作和维护和C18柱完全相同。CN柱用于反相条件时，CN键会水解，尤其是在pH1.5-7.0范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用，需要清洗一下，也需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：95%水/5%乙腈、THF四氢呋喃、95%乙腈/5%水并保持95%乙腈/5%水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。在pH1.5-7.0条件时，也比较伤柱子，使用完以后要注意冲洗，可以参照上述方法，时间不需要那么长，可适当减少。柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可如正相时清洗一下柱子恢复柱性能，清洗时用10倍柱体积的下列溶液冲洗： 95%水/5%乙腈、THF四氢呋喃、95%乙腈/5%水再走流动相即可。

氨基柱的再生：
方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
方案2：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：95％水/5％乙腈; THF四氢呋喃; 95％乙腈/5％水; 并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。
方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：95％水/5％乙腈; THF四氢呋喃; 95％乙腈/5％水 再走流动相即可。

这些研究资料网上很多，搜一下多得是了。

[ Last edited by 痴夷子皮 on 2013-1-6 at 08:32 ]
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守候在风中的宁静。
6楼2013-01-06 08:31:03
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
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痴夷子皮: 金币+1, 3Q ，欢迎常来哦 2013-01-07 08:16:29
试试waters的XBridge Amide柱
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中华人民共和国公民有言论、出版、集会、结社、游行、示威的自由。---中国人民共和国宪法二章三十五条
7楼2013-01-06 12:08:03
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ionlylike

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by akosrios at 2013-01-06 12:08:03
试试waters的XBridge Amide柱

请问这款柱子有什么特点，使用时候有什么要注意的地方么？
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出于绝望，我爱上了我自己。。。
8楼2015-01-16 14:27:07
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cpu_haoxia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lilylily111 at 2013-01-05 20:28:23
我做过一个氨基酸的项目 确实氨基柱的冲柱子的方法  你可以好好看下说明书
我们一个项目也要好多柱子 但后来摸索到一种氨基柱 很好用 你可试试

请问是哪种氨基柱呢？
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相信自己
9楼2016-10-18 11:47:43
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不离不弃MG

金虫 (小有名气)
同样遇到这样的问题，检测条件和楼主一样，现在基线噪声特别大，想问下最后是怎么解决的？
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迷失的人迷失了，相逢的人会再相逢
10楼2019-04-25 08:42:01
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