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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 伤不起的氨基柱啊
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喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方

[求助] 伤不起的氨基柱啊

参考USP34-NF检测某物质含量：用4.6mmX150mm,5um氨基柱，流速1.5ml/min,(20mM磷酸氢二钾+0.25%氨水+磷酸调节PH=7.5)-乙腈=30-70，进样量20uL,柱温40℃，检测波长195nm；样品浓度1mg/ml(用50%乙腈溶解）。买了菲罗门短柱一根，用了7天，主峰峰宽由0.15变为0.5，理论塔板数由3000下降为600.
每次用之前90%水-乙腈冲洗40min,换90%乙腈-水冲30min,换30%水-乙腈冲30min,再上流动相冲50min,开始进样品。用完以后90%水-乙腈冲洗1h,再90%乙腈-水冲洗40min,保存。
后来试过热电的250mm 氨基柱；用了大概一个月也出现了类似的问题，柱效下降，基线抖动非常厉害。
特来请教一下各位，有没有人做过，用什么柱子比较好？抑或问题可能出在哪里？该如何解决比较好妥当？
在此谢过各位！

[ Last edited by 喵喵与咩咩 on 2013-1-5 at 11:11 ]
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生命不息，奋斗不止
1楼2013-01-05 11:09:43
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sunxiaoyang010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 看来水相太高了。柱子用完我就保存在90%乙腈里面的，异丙倒是没有用来冲洗和保存醇 2013-01-05 21:04:15
痴夷子皮: 金币+1, 3Q ，欢迎常来哦。 2013-01-06 08:19:37
氨基柱本来就比较脆弱的，水相不能高，一般30%就算很高了。柱子用完了，过度之后，可以用异丙醇冲洗保存，下次使用时候还要注意过渡。 即使是这样，我之前一个项目也用了3-4根，虽然柱效下降没你的厉害，但是我的杂质分不开了，只好买新的。菲罗门的。
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4楼2013-01-05 18:29:33
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hzjd1997

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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从头开始: 金币+1, 感谢参与 2013-01-05 16:55:56
喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 流动相中含有缓冲盐，不用大比例的水相怎么可以冲洗干净呢？不知道您有什么建议呢？ 2013-01-05 21:30:50
你冲柱的方法有问题，冲洗氨基柱流动相中有机相不能低于40%，氨基柱本来就是正相柱，水量高了容易坏
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2楼2013-01-05 16:39:55
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古可ぷ

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主优秀版主
楼主莫非做的是缬沙坦
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非吾小天下，才高而已；非吾纵古今，时赋而已；非吾睨九州，宏观而已；三非焉罪？无梦至胜
3楼2013-01-05 18:09:40
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lilylily111

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 说明书我看过的，我冲洗方法问题不大。不知道您说的一种氨基柱是哪个牌子的？可否告知一下？谢谢！ 2013-01-05 21:05:29
痴夷子皮: 金币+1, 3Q ，欢迎常来哦。 2013-01-06 08:19:42
我做过一个氨基酸的项目 确实氨基柱的冲柱子的方法  你可以好好看下说明书
我们一个项目也要好多柱子 但后来摸索到一种氨基柱 很好用 你可试试
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smile
5楼2013-01-05 20:28:23
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