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喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方

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[求助] 伤不起的氨基柱啊

参考USP34-NF检测某物质含量：用4.6mmX150mm,5um氨基柱，流速1.5ml/min,(20mM磷酸氢二钾+0.25%氨水+磷酸调节PH=7.5)-乙腈=30-70，进样量20uL,柱温40℃，检测波长195nm；样品浓度1mg/ml(用50%乙腈溶解）。买了菲罗门短柱一根，用了7天，主峰峰宽由0.15变为0.5，理论塔板数由3000下降为600.
每次用之前90%水-乙腈冲洗40min,换90%乙腈-水冲30min,换30%水-乙腈冲30min,再上流动相冲50min,开始进样品。用完以后90%水-乙腈冲洗1h,再90%乙腈-水冲洗40min,保存。
后来试过热电的250mm 氨基柱；用了大概一个月也出现了类似的问题，柱效下降，基线抖动非常厉害。
特来请教一下各位，有没有人做过，用什么柱子比较好？抑或问题可能出在哪里？该如何解决比较好妥当？
在此谢过各位！

[ Last edited by 喵喵与咩咩 on 2013-1-5 at 11:11 ]

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生命不息，奋斗不止

1楼2013-01-05 11:09:43

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痴夷子皮

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老痞

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
喵喵与咩咩: 金币+1, ★有帮助, 这些资料，我基本都看过，也试过其中几个方法，再生基本无效；反冲也是枉然 2013-01-06 11:05:08

关于氨基柱的保养：
像楼主这种情况，氨基柱作反相使用时，操作和维护和C18柱完全相同。CN柱用于反相条件时，CN键会水解，尤其是在pH1.5-7.0范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用，需要清洗一下，也需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：95%水/5%乙腈、THF四氢呋喃、95%乙腈/5%水并保持95%乙腈/5%水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。在pH1.5-7.0条件时，也比较伤柱子，使用完以后要注意冲洗，可以参照上述方法，时间不需要那么长，可适当减少。柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可如正相时清洗一下柱子恢复柱性能，清洗时用10倍柱体积的下列溶液冲洗： 95%水/5%乙腈、THF四氢呋喃、95%乙腈/5%水再走流动相即可。

氨基柱的再生：
方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
方案2：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：95％水/5％乙腈; THF四氢呋喃; 95％乙腈/5％水; 并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。
方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：95％水/5％乙腈; THF四氢呋喃; 95％乙腈/5％水再走流动相即可。

这些研究资料网上很多，搜一下多得是了。

[ Last edited by 痴夷子皮 on 2013-1-6 at 08:32 ]