24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2053  |  回复: 20

随时领金币

新虫 (初入文坛)

[求助] 安捷伦氨基酸方法包分析氨基酸,RSD偏高怎么办?

我们用的是安捷伦氨基酸方法包,按照方法包中的说明是:
A相-40mM磷酸氢二钠(pH7.8);B相-甲醇:乙腈:水(45:45:10),梯度洗脱
其余都是按照方法包中的说明进行操作的,用17种标准氨基酸混合液(商品,浓度1nmol/ul)分6个批次进行分析。

现在的问题是:

1.先说保留时间的相对标准偏差(RSD),我的结果是:17种氨基酸的平均RSD在1.09%,而说明书上关于峰面积的平均RSD为0.18%;
2.再说峰面积的相对标准偏差(RSD),我的结果是:17种氨基酸的平均RSD在13.08%,而说明书上关于峰面积的平均RSD为2.0%左右。

结论是我的操作时说明书上相对偏差的10倍左右

请教:问题会出在哪里?以后操作时该注意那些事情?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jyp2002

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助~ 2012-08-18 21:50:06
随时领金币: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-19 22:09:14
agilent和water都有自己的氨基酸分析方法包,我做过waters的,估计和agilent的差不多,都是柱前衍生吧?
从我上千次的操作经验来看,这么仪器公司提供的所谓重现性很好的方法包,根本就重复不出厂家所说的结果出来。楼主能够做到峰面积的RSD在13%已经不错了。你要是比较次与次之间的偏差,会发现更大。
3楼2012-08-18 07:47:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heyo_123

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


soundhorizo: 金币+1, 感谢应助 鼓励交流 ^^ 2012-08-19 00:46:01
样品前处理做的足够仔细,RSD会小很多,,,基线是否飘逸,,基质干扰,,手动积分?自动积分???这些不能小窥,,,用到了无机盐,,有仔细维护HPLC吗???每次检测时,柱压是否一致??测别的物质RSD会偏离这么大吗???
6楼2012-08-18 22:44:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolianhai

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
随时领金币: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-19 22:06:35
换台检测器,不换柱子,看看RSD值怎么样;
换个柱子,不换检测器,看看RSD值怎么样;
反正一次换一个因素就可以了,试试看呗。
还有,厂家提供的方法都是在N多实验结果中取的最好的结果,只要你的RSD值符合要求就可以了,没必要一定要符合厂家的指标
8楼2012-08-19 14:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

随时领金币

新虫 (初入文坛)

如何能确定是检测器有问题,如何又能确定是柱子问题,才导致我的结果的相对标准偏差是方法包中的说明书上的十倍
2楼2012-08-17 21:45:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随时领金币

新虫 (初入文坛)

是柱前衍生。用已知浓度的氨基酸和DMEM以及1640验证该方法包,结果偏差不大,但一分析商品培养基就出问题了,两次结果能差一倍之多,问题到底在那里?
4楼2012-08-18 20:55:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heyo_123

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没做过氨基酸的检测,以个人经验看来,,样品前处理还不够仔细,,,
5楼2012-08-18 22:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用标准样品做的时候有没有问题?
7楼2012-08-19 10:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随时领金币

新虫 (初入文坛)

手机党伤不起阿,谢谢大家,现在只能从以下方面排查了,进样器,检测器,柱子,仪器维护,积分方式,基质,预处理等方面一一排查了。
9楼2012-08-19 22:05:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wy511813

银虫 (小有名气)

我看到你的缓冲盐很高啊,盐浓度大了对仪器是个考验。
开心每一天
10楼2012-08-20 09:06:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 随时领金币 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 山东高校教师考核超级无底线,员工过不下去啦 +3 qut2026 2026-04-09 5/250 2026-04-10 22:52 by qut2026
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +4 弱水听文 2026-04-09 4/200 2026-04-10 22:01 by doctff
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +8 你让我怎么荔枝 2026-04-10 9/450 2026-04-10 21:46 by fxue1114
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 材料专业344求调剂 +16 hualkop 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 17:28 by laoshidan
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +27 努力奋斗112 2026-04-07 30/1500 2026-04-10 15:06 by Kilig0317
[考研] 求调剂 +11 雪逢冬 2026-04-10 11/550 2026-04-10 14:38 by Abskk
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 301求调剂 +6 静静想想 2026-04-05 6/300 2026-04-10 09:15 by Delta2012
[考研] 生物与医药调剂 +5 十七sa 2026-04-05 5/250 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 269求调剂 +7 跪求收留。 2026-04-04 7/350 2026-04-09 19:06 by 探123
[考研] 316求调剂 +3 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 3/150 2026-04-09 17:31 by wp06
[考研] 本科郑州大学,一志愿华东师范大学282求调剂 +23 熊哥xtk 2026-04-07 26/1300 2026-04-09 17:17 by 18446523
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考博] 材料方向考博,求推荐 +3 言语aaa 2026-04-05 4/200 2026-04-08 22:22 by nxgogo
[考研] 专硕310求调剂 +7 捞捞我…. 2026-04-04 8/400 2026-04-08 20:24 by yutian743
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
信息提示
请填处理意见