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新虫 (初入文坛)

[求助] 安捷伦氨基酸方法包分析氨基酸,RSD偏高怎么办?

我们用的是安捷伦氨基酸方法包,按照方法包中的说明是:
A相-40mM磷酸氢二钠(pH7.8);B相-甲醇:乙腈:水(45:45:10),梯度洗脱
其余都是按照方法包中的说明进行操作的,用17种标准氨基酸混合液(商品,浓度1nmol/ul)分6个批次进行分析。

现在的问题是:

1.先说保留时间的相对标准偏差(RSD),我的结果是:17种氨基酸的平均RSD在1.09%,而说明书上关于峰面积的平均RSD为0.18%;
2.再说峰面积的相对标准偏差(RSD),我的结果是:17种氨基酸的平均RSD在13.08%,而说明书上关于峰面积的平均RSD为2.0%左右。

结论是我的操作时说明书上相对偏差的10倍左右

请教:问题会出在哪里?以后操作时该注意那些事情?
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jyp2002

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助~ 2012-08-18 21:50:06
随时领金币: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-19 22:09:14
agilent和water都有自己的氨基酸分析方法包,我做过waters的,估计和agilent的差不多,都是柱前衍生吧?
从我上千次的操作经验来看,这么仪器公司提供的所谓重现性很好的方法包,根本就重复不出厂家所说的结果出来。楼主能够做到峰面积的RSD在13%已经不错了。你要是比较次与次之间的偏差,会发现更大。
3楼2012-08-18 07:47:40
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heyo_123

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
soundhorizo: 金币+1, 感谢应助 鼓励交流 ^^ 2012-08-19 00:46:01
样品前处理做的足够仔细,RSD会小很多,,,基线是否飘逸,,基质干扰,,手动积分?自动积分???这些不能小窥,,,用到了无机盐,,有仔细维护HPLC吗???每次检测时,柱压是否一致??测别的物质RSD会偏离这么大吗???
6楼2012-08-18 22:44:22
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zhaolianhai

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
随时领金币: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-19 22:06:35
换台检测器,不换柱子,看看RSD值怎么样;
换个柱子,不换检测器,看看RSD值怎么样;
反正一次换一个因素就可以了,试试看呗。
还有,厂家提供的方法都是在N多实验结果中取的最好的结果,只要你的RSD值符合要求就可以了,没必要一定要符合厂家的指标
8楼2012-08-19 14:32:01
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普通回帖

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新虫 (初入文坛)

如何能确定是检测器有问题,如何又能确定是柱子问题,才导致我的结果的相对标准偏差是方法包中的说明书上的十倍
2楼2012-08-17 21:45:43
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新虫 (初入文坛)

是柱前衍生。用已知浓度的氨基酸和DMEM以及1640验证该方法包,结果偏差不大,但一分析商品培养基就出问题了,两次结果能差一倍之多,问题到底在那里?
4楼2012-08-18 20:55:16
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heyo_123

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没做过氨基酸的检测,以个人经验看来,,样品前处理还不够仔细,,,
5楼2012-08-18 22:40:14
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用标准样品做的时候有没有问题?
7楼2012-08-19 10:57:08
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新虫 (初入文坛)

手机党伤不起阿,谢谢大家,现在只能从以下方面排查了,进样器,检测器,柱子,仪器维护,积分方式,基质,预处理等方面一一排查了。
9楼2012-08-19 22:05:23
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wy511813

银虫 (小有名气)

我看到你的缓冲盐很高啊,盐浓度大了对仪器是个考验。
开心每一天
10楼2012-08-20 09:06:48
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