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新虫 (初入文坛)

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10楼: Originally posted by wy511813 at 2012-08-20 09:06:48
我看到你的缓冲盐很高啊,盐浓度大了对仪器是个考验。

实说A相(40mM磷酸氢二钠(pH7.8))吗?也就是5.5g磷酸氢二钠一水+1升水,这个浓度也高啊,这是方法包中指导浓度,应该不会有问题吧
11楼2012-08-20 10:05:35
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新虫 (初入文坛)

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7楼: Originally posted by yugijiang at 2012-08-19 10:57:08
你用标准样品做的时候有没有问题?

这个数据就是用标准品做的,如果是样品的话偏差更大,几乎能差一倍
12楼2012-08-20 10:07:16
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新虫 (初入文坛)

★ ★
xbqewpq: 金币+2, 感谢应助,欢迎常来交流 2012-08-20 16:34:26
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3楼: Originally posted by jyp2002 at 2012-08-18 07:47:40
agilent和water都有自己的氨基酸分析方法包,我做过waters的,估计和agilent的差不多,都是柱前衍生吧?
从我上千次的操作经验来看,这么仪器公司提供的所谓重现性很好的方法包,根本就重复不出厂家所说的结果出来 ...

你做氨基酸分析是分析游离氨基酸吗?涉及不涉及动物培养基以及培养液中游离氨基酸的测定,若涉及,您如何做预处理?我们的预处理是200ml样品+800ml无水乙醇,涡旋震荡30分钟,12000rpm20min,上清进样分析。可有资料显示是直接进样或高速离心后上清进样分析,这样的话我的考虑是培养基中的蛋白/糖等物质会不会堵塞柱子
13楼2012-08-20 10:16:13
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新虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by heyo_123 at 2012-08-18 22:44:22
样品前处理做的足够仔细,RSD会小很多,,,基线是否飘逸,,基质干扰,,手动积分?自动积分???这些不能小窥,,,用到了无机盐,,有仔细维护HPLC吗???每次检测时,柱压是否一致??测别的物质RSD会偏离这么 ...

最后一次实验基线飘的很厉害,尤其是262nm下的基线已经不成样子了;至于基质干扰,应该不存在问题,因为是用商品氨基酸标样,浓度都是1nmol/ul的,应该除了17种氨基酸外没有其他物质;至于积分方式,只能是自动积分,这个是会有所影响的,谢谢;还有就是柱压的问题,还真没有注意,下次一定注意;维护HPLC?更不好说了,是公用的,可想可知了。
14楼2012-08-20 10:23:01
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新虫 (初入文坛)

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5楼: Originally posted by heyo_123 at 2012-08-18 22:40:14
没做过氨基酸的检测,以个人经验看来,,样品前处理还不够仔细,,,

都是用商品氨基酸标样检测的,还没有涉及预处理的问题
15楼2012-08-20 10:24:33
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vetszh1181

银虫 (小有名气)

这种柱前衍生方法,平行度不行,肯定还是出在衍生上,衍生时间,温度等等
16楼2012-08-20 12:15:15
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jyp2002

银虫 (小有名气)

我做的是纯氨基酸,不用衍生。
17楼2012-08-20 13:49:50
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tangxinyu

铁虫 (初入文坛)

色谱柱要提前平衡好
流动相ph注意啦
基线漂移一般不是柱子没平衡好就是有气泡
你看看直接走1的流速不走梯度,压力波动大不?
作余挖井
18楼2012-08-20 16:09:12
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新虫 (初入文坛)

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16楼: Originally posted by vetszh1181 at 2012-08-20 12:15:15
这种柱前衍生方法,平行度不行,肯定还是出在衍生上,衍生时间,温度等等

要是出在衍生上,只能是衍生试剂方面的因素了,因为按说明opa以及fmoc一旦开封分装,每一瓶分装的试剂也只能用1次,每天更换,最好在10天内使用,因为氧化的缘故,第10天左右使用的分装试剂是不是就没有第一天分装的试剂好,进而导致结果不好
19楼2012-08-20 16:16:48
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vetszh1181

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 随时领金币 at 2012-08-20 16:16:48
要是出在衍生上,只能是衍生试剂方面的因素了,因为按说明opa以及fmoc一旦开封分装,每一瓶分装的试剂也只能用1次,每天更换,最好在10天内使用,因为氧化的缘故,第10天左右使用的分装试剂是不是就没有第一天分装 ...

柱前衍生是很难做到完全重现的
20楼2012-08-20 22:29:32
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