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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 安捷伦氨基酸方法包分析氨基酸，RSD偏高怎么办？
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新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by wy511813 at 2012-08-20 09:06:48
我看到你的缓冲盐很高啊，盐浓度大了对仪器是个考验。

实说A相（40mM磷酸氢二钠（pH7.8））吗？也就是5.5g磷酸氢二钠一水+1升水，这个浓度也高啊，这是方法包中指导浓度，应该不会有问题吧
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11楼2012-08-20 10:05:35
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新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by yugijiang at 2012-08-19 10:57:08
你用标准样品做的时候有没有问题？

这个数据就是用标准品做的，如果是样品的话偏差更大，几乎能差一倍
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12楼2012-08-20 10:07:16
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新虫 (初入文坛)
★ ★
xbqewpq: 金币+2, 感谢应助，欢迎常来交流 2012-08-20 16:34:26
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3楼: Originally posted by jyp2002 at 2012-08-18 07:47:40
agilent和water都有自己的氨基酸分析方法包，我做过waters的，估计和agilent的差不多，都是柱前衍生吧？
从我上千次的操作经验来看，这么仪器公司提供的所谓重现性很好的方法包，根本就重复不出厂家所说的结果出来 ...

你做氨基酸分析是分析游离氨基酸吗？涉及不涉及动物培养基以及培养液中游离氨基酸的测定，若涉及，您如何做预处理？我们的预处理是200ml样品+800ml无水乙醇，涡旋震荡30分钟，12000rpm20min，上清进样分析。可有资料显示是直接进样或高速离心后上清进样分析，这样的话我的考虑是培养基中的蛋白/糖等物质会不会堵塞柱子
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13楼2012-08-20 10:16:13
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新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by heyo_123 at 2012-08-18 22:44:22
样品前处理做的足够仔细，RSD会小很多，，，基线是否飘逸，，基质干扰，，手动积分？自动积分？？？这些不能小窥，，，用到了无机盐，，有仔细维护HPLC吗？？？每次检测时，柱压是否一致？？测别的物质RSD会偏离这么 ...

最后一次实验基线飘的很厉害，尤其是262nm下的基线已经不成样子了；至于基质干扰，应该不存在问题，因为是用商品氨基酸标样，浓度都是1nmol/ul的，应该除了17种氨基酸外没有其他物质；至于积分方式，只能是自动积分，这个是会有所影响的，谢谢；还有就是柱压的问题，还真没有注意，下次一定注意；维护HPLC？更不好说了，是公用的，可想可知了。
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14楼2012-08-20 10:23:01
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新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by heyo_123 at 2012-08-18 22:40:14
没做过氨基酸的检测，以个人经验看来，，样品前处理还不够仔细，，，

都是用商品氨基酸标样检测的，还没有涉及预处理的问题
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15楼2012-08-20 10:24:33
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vetszh1181

银虫 (小有名气)
这种柱前衍生方法,平行度不行,肯定还是出在衍生上,衍生时间,温度等等
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16楼2012-08-20 12:15:15
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jyp2002

银虫 (小有名气)
我做的是纯氨基酸，不用衍生。
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17楼2012-08-20 13:49:50
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tangxinyu

铁虫 (初入文坛)
色谱柱要提前平衡好
流动相ph注意啦
基线漂移一般不是柱子没平衡好就是有气泡
你看看直接走1的流速不走梯度，压力波动大不？
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作余挖井
18楼2012-08-20 16:09:12
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新虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by vetszh1181 at 2012-08-20 12:15:15
这种柱前衍生方法,平行度不行,肯定还是出在衍生上,衍生时间,温度等等

要是出在衍生上，只能是衍生试剂方面的因素了，因为按说明opa以及fmoc一旦开封分装，每一瓶分装的试剂也只能用1次，每天更换，最好在10天内使用，因为氧化的缘故，第10天左右使用的分装试剂是不是就没有第一天分装的试剂好，进而导致结果不好
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19楼2012-08-20 16:16:48
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vetszh1181

银虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by 随时领金币 at 2012-08-20 16:16:48
要是出在衍生上，只能是衍生试剂方面的因素了，因为按说明opa以及fmoc一旦开封分装，每一瓶分装的试剂也只能用1次，每天更换，最好在10天内使用，因为氧化的缘故，第10天左右使用的分装试剂是不是就没有第一天分装 ...

柱前衍生是很难做到完全重现的
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20楼2012-08-20 22:29:32
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