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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 安捷伦氨基酸方法包分析氨基酸，RSD偏高怎么办？
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新虫 (初入文坛)

[求助] 安捷伦氨基酸方法包分析氨基酸，RSD偏高怎么办？

我们用的是安捷伦氨基酸方法包，按照方法包中的说明是：
A相-40mM磷酸氢二钠（pH7.8）；B相-甲醇：乙腈：水（45：45：10），梯度洗脱
其余都是按照方法包中的说明进行操作的，用17种标准氨基酸混合液（商品，浓度1nmol/ul）分6个批次进行分析。

现在的问题是：

1.先说保留时间的相对标准偏差(RSD)，我的结果是：17种氨基酸的平均RSD在1.09%，而说明书上关于峰面积的平均RSD为0.18%；
2.再说峰面积的相对标准偏差(RSD)，我的结果是：17种氨基酸的平均RSD在13.08%，而说明书上关于峰面积的平均RSD为2.0%左右。

结论是我的操作时说明书上相对偏差的10倍左右

请教：问题会出在哪里？以后操作时该注意那些事情？
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1楼 2012-08-17 16:22:46
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by heyo_123 at 2012-08-18 22:44:22
样品前处理做的足够仔细，RSD会小很多，，，基线是否飘逸，，基质干扰，，手动积分？自动积分？？？这些不能小窥，，，用到了无机盐，，有仔细维护HPLC吗？？？每次检测时，柱压是否一致？？测别的物质RSD会偏离这么 ...

最后一次实验基线飘的很厉害，尤其是262nm下的基线已经不成样子了；至于基质干扰，应该不存在问题，因为是用商品氨基酸标样，浓度都是1nmol/ul的，应该除了17种氨基酸外没有其他物质；至于积分方式，只能是自动积分，这个是会有所影响的，谢谢；还有就是柱压的问题，还真没有注意，下次一定注意；维护HPLC？更不好说了，是公用的，可想可知了。
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14楼2012-08-20 10:23:01
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新虫 (初入文坛)
如何能确定是检测器有问题，如何又能确定是柱子问题，才导致我的结果的相对标准偏差是方法包中的说明书上的十倍
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2楼2012-08-17 21:45:43
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jyp2002

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助~ 2012-08-18 21:50:06
随时领金币: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-19 22:09:14
agilent和water都有自己的氨基酸分析方法包，我做过waters的，估计和agilent的差不多，都是柱前衍生吧？
从我上千次的操作经验来看，这么仪器公司提供的所谓重现性很好的方法包，根本就重复不出厂家所说的结果出来。楼主能够做到峰面积的RSD在13%已经不错了。你要是比较次与次之间的偏差，会发现更大。
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3楼2012-08-18 07:47:40
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新虫 (初入文坛)
是柱前衍生。用已知浓度的氨基酸和DMEM以及1640验证该方法包，结果偏差不大，但一分析商品培养基就出问题了，两次结果能差一倍之多，问题到底在那里？
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4楼2012-08-18 20:55:16
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