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新虫 (初入文坛)

[求助] 安捷伦氨基酸方法包分析氨基酸,RSD偏高怎么办?

我们用的是安捷伦氨基酸方法包,按照方法包中的说明是:
A相-40mM磷酸氢二钠(pH7.8);B相-甲醇:乙腈:水(45:45:10),梯度洗脱
其余都是按照方法包中的说明进行操作的,用17种标准氨基酸混合液(商品,浓度1nmol/ul)分6个批次进行分析。

现在的问题是:

1.先说保留时间的相对标准偏差(RSD),我的结果是:17种氨基酸的平均RSD在1.09%,而说明书上关于峰面积的平均RSD为0.18%;
2.再说峰面积的相对标准偏差(RSD),我的结果是:17种氨基酸的平均RSD在13.08%,而说明书上关于峰面积的平均RSD为2.0%左右。

结论是我的操作时说明书上相对偏差的10倍左右

请教:问题会出在哪里?以后操作时该注意那些事情?
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vetszh1181

银虫 (小有名气)

这种柱前衍生方法,平行度不行,肯定还是出在衍生上,衍生时间,温度等等
16楼2012-08-20 12:15:15
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vetszh1181

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 随时领金币 at 2012-08-20 16:16:48
要是出在衍生上,只能是衍生试剂方面的因素了,因为按说明opa以及fmoc一旦开封分装,每一瓶分装的试剂也只能用1次,每天更换,最好在10天内使用,因为氧化的缘故,第10天左右使用的分装试剂是不是就没有第一天分装 ...

柱前衍生是很难做到完全重现的
20楼2012-08-20 22:29:32
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