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努力超人

新虫 (初入文坛)

[交流] 苯丙氨酸解氨酶活性测定的一些问题 已有8人参与

本人在测定苯丙氨酸解氨酶时,不知道为什么分光光度计的读书不停地跳动,总之不能停留在一个稳定读数上,求哪位高人指点一下,多谢。。。我的实验方法是:

PAL的提取与活性的测定
      按照Lister等的方法[19]并略有改进. 0.5 g甘薯材料加入5 mL的提取液[0•2 M硼酸盐缓冲液(pH8.8), 0.018 Mβ-巯基乙醇], 0.1 g PVPP(以去除酚类物质对颜色的干扰),加少量石英砂,于-20℃预冷的研钵中冰浴研磨, 4层纱布过滤.滤液经4℃, 15 000 g离心20 min,取上清液作为粗酶液,用于PAL活性测定.
     取1 mL粗酶液加2 mL蒸馏水再加1 mL反应底物(0•02 M的L-苯丙氨酸),对照不加底物,加1mL蒸馏水. 34℃恒温水浴30 min, 加0.5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)终止反应. 12 000 g离心10 min去除变性蛋白,于290 nm波长处测定吸光度. 以1 mL反应液每小时在290 nm处吸光度变化0.01为1个酶活单位, 用U表示
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k9b12z9

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 零点泡沫 at 2013-08-05 15:51:54
方法应该没啥问题,每次使用分光光度计之前,有没有矫正归零?如果读书总跳动,有可能是机器内的氘灯能量不足了,所以读数不稳定,我用的方法最后用6M HCl 终止反应,不过应该差不多

楼主 实验做完有没有相关论文啊 求参考
我在这里
5楼2014-03-14 13:05:13
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零点泡沫

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
方法应该没啥问题,每次使用分光光度计之前,有没有矫正归零?如果读书总跳动,有可能是机器内的氘灯能量不足了,所以读数不稳定,我用的方法最后用6M HCl 终止反应,不过应该差不多
2楼2013-08-05 15:51:54
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c497238258

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
亲,想问一下在离心时怎么保证是4摄氏度呢
3楼2013-08-28 10:18:00
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Bruceyao

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主可以把Lister等的方法给我吗?谢了
4楼2014-01-13 11:08:15
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