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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 学术交流区 » 论文投稿 » 交流 » 苯丙氨酸解氨酶活性测定的一些问题
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努力超人

新虫 (初入文坛)

[交流] 苯丙氨酸解氨酶活性测定的一些问题 已有8人参与

本人在测定苯丙氨酸解氨酶时，不知道为什么分光光度计的读书不停地跳动，总之不能停留在一个稳定读数上，求哪位高人指点一下，多谢。。。我的实验方法是：

PAL的提取与活性的测定
      按照Lister等的方法[19]并略有改进. 0.5 g甘薯材料加入5 mL的提取液[0•2 M硼酸盐缓冲液(pH8.8), 0.018 Mβ-巯基乙醇], 0.1 g PVPP(以去除酚类物质对颜色的干扰),加少量石英砂,于-20℃预冷的研钵中冰浴研磨, 4层纱布过滤.滤液经4℃, 15 000 g离心20 min,取上清液作为粗酶液,用于PAL活性测定.
     取1 mL粗酶液加2 mL蒸馏水再加1 mL反应底物(0•02 M的L-苯丙氨酸),对照不加底物,加1mL蒸馏水. 34℃恒温水浴30 min, 加0.5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)终止反应. 12 000 g离心10 min去除变性蛋白,于290 nm波长处测定吸光度. 以1 mL反应液每小时在290 nm处吸光度变化0.01为1个酶活单位, 用U表示
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1楼 2013-07-31 14:22:27
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零点泡沫

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
方法应该没啥问题，每次使用分光光度计之前，有没有矫正归零？如果读书总跳动，有可能是机器内的氘灯能量不足了，所以读数不稳定，我用的方法最后用6M HCl 终止反应，不过应该差不多
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2楼2013-08-05 15:51:54
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c497238258

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
亲，想问一下在离心时怎么保证是4摄氏度呢
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3楼2013-08-28 10:18:00
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Bruceyao

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主可以把Lister等的方法给我吗？谢了
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4楼2014-01-13 11:08:15
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k9b12z9

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 零点泡沫 at 2013-08-05 15:51:54
方法应该没啥问题，每次使用分光光度计之前，有没有矫正归零？如果读书总跳动，有可能是机器内的氘灯能量不足了，所以读数不稳定，我用的方法最后用6M HCl 终止反应，不过应该差不多

楼主 实验做完有没有相关论文啊 求参考
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我在这里
5楼2014-03-14 13:05:13
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k9b12z9

银虫 (小有名气)
楼主实验完成后有没有做好相关论文啊 求参考
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我在这里
6楼2014-03-14 13:06:15
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
★
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分光光度计没有选错吧？有些量程不能测到290nm的，所以会不停的跳，
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7楼2014-12-26 14:53:21
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ncyinghan
8楼2014-12-27 10:58:56
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菁mm

新虫 (初入文坛)
★
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你用的是紫外分光光度计吗？如果是可见分光光度计是不能调零的，也不能测定。在290nm处测只能用紫外分光光度计
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9楼2016-11-29 10:42:28
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最帅的超超

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by c497238258 at 2013-08-28 10:18:00
亲，想问一下在离心时怎么保证是4摄氏度呢

低温离心机

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10楼2020-01-10 12:03:53
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