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happyheleny

铜虫 (初入文坛)

[求助] 这个是变性超螺旋么?

大肠杆菌提质粒——最下面出现的条带是超螺旋变性么?怎么才能避免呢?我用试剂盒做的大量提取,加溶液I和溶液II后非常轻柔的混匀的。溶液II裂解的时间4分钟也不算长。
这个是变性超螺旋么?
未命名.JPG



[ Last edited by happyheleny on 2013-7-24 at 14:45 ]
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eulota

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-07-24 20:28:52
amisking: 回帖置顶 2013-07-24 20:28:54
其实你的超螺旋状态质粒占了大部分,提取的质量已经很好了。
而相对来说,断裂的质粒部分占的比例很少,是不是不需要纠结这个?
我认为,最亮的那个条带是超螺旋,前面的两条更小的带可能是断裂的片段,而非楼主所说的“超螺旋变性”。
电泳泳道最前方并没有看到RNA的污染。

仅供参考。
3楼2013-07-24 18:43:56
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普通回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
happyheleny(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-24 16:40:27
提取出来的质粒是什么状态并不重要,关键是质粒纯且浓度高就好了。
单酶切下就知道你的质粒纯不纯,是不是有RNA污染。
2楼2013-07-24 16:24:10
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