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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 琼脂糖凝胶电泳技术咨询
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舟之帆

木虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳技术咨询

为什么Marker还是跑成弯弯曲曲的？不过为什么我的琼脂糖熔解（5分钟，中火）后，里面还是有絮状沉淀，无论我熔解多少次都是一样的。然后，电压设定为120V，在跑胶过程中，电泳浮动范围：114-104V，这有没有影响的啊？
琼脂糖凝胶电泳技术咨询
Administrator 2013-07-03 17 小时 47 分钟.jpg
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1楼 2013-07-04 14:03:02
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
舟之帆: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-04 16:54:34
myprayer: 金币+1, 回答很好，perfect 2013-07-04 17:26:12
应该是配胶时没融化好。建议在配置前瓶子一定洗干净，在加入电泳液后先搅匀，然后用高火煮一分半到两分钟，最好不要超过两分钟。煮的时间过长水分蒸发胶浓度会变大，不利于DNA移动
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3楼2013-07-04 15:37:35
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薛虹妮

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
舟之帆: 金币+2, 我已经换了3个marker了，全都一样的，都是前第二、三条带弯曲，其他都是直的，还有胶每次配都是一样的，都有沉淀，换了三批琼脂糖，还是西班牙进口的呢，都一样。现在我郁闷死了.... 2013-07-04 15:16:36
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-04 17:26:00
楼主，有沉淀的胶就换了吧，正常应该是透明滴~~
还有，是不是点样空底部有微小气泡导致条带弯曲啊，可是看起来也不至于这么巧合~~~
或者换个新maker试试吧···
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2楼2013-07-04 15:02:50
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薛虹妮

银虫 (小有名气)
楼主跑多大的分子？
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4楼2013-07-04 23:54:00
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-06 17:18:08
舟之帆: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-07-19 21:42:51
一般来说不至于溶解那么多次还会有絮状沉淀啊！
1 电泳液是新配的吗？电泳液如果有沉淀就要配新的了
2 如3楼说的，瓶子要干净，琼脂粉在煮之前先搅匀，我自己配胶时，往往是先倒缓冲液，再放琼脂糖，这样会比较容易均匀分散
3 你跑了多久呢？我看你的marker怎么好像有降解的样子，一般marker的设计都会在某个分子量上的量比较大，从而方便我们比对、判断分子量大小，你的每个marker都是到后面就很亮，像有降解。建议跑的时间比较长的话，在电泳槽下放些冰袋。
4 从这个图片来看，胶的确没有配好，可能胶孔有损伤，或有气泡。
5 电泳时，把胶放在电泳槽正中间，那里的电压电流应该比较稳定。
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思路决定出路。。。
5楼2013-07-06 17:11:43
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