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舟之帆

木虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳技术咨询

为什么Marker还是跑成弯弯曲曲的?不过为什么我的琼脂糖熔解(5分钟,中火)后,里面还是有絮状沉淀,无论我熔解多少次都是一样的。然后,电压设定为120V,在跑胶过程中,电泳浮动范围:114-104V,这有没有影响的啊?
琼脂糖凝胶电泳技术咨询
Administrator 2013-07-03 17 小时 47 分钟.jpg
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薛虹妮

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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舟之帆: 金币+2, 我已经换了3个marker了,全都一样的,都是前第二、三条带弯曲,其他都是直的,还有胶每次配都是一样的,都有沉淀,换了三批琼脂糖,还是西班牙进口的呢,都一样。现在我郁闷死了.... 2013-07-04 15:16:36
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-04 17:26:00
楼主,有沉淀的胶就换了吧,正常应该是透明滴~~
还有,是不是点样空底部有微小气泡导致条带弯曲啊,可是看起来也不至于这么巧合~~~
或者换个新maker试试吧···
2楼2013-07-04 15:02:50
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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舟之帆: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-04 16:54:34
myprayer: 金币+1, 回答很好,perfect 2013-07-04 17:26:12
应该是配胶时没融化好。建议在配置前瓶子一定洗干净,在加入电泳液后先搅匀,然后用高火煮一分半到两分钟,最好不要超过两分钟。煮的时间过长水分蒸发胶浓度会变大,不利于DNA移动
3楼2013-07-04 15:37:35
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薛虹妮

银虫 (小有名气)

楼主跑多大的分子?
4楼2013-07-04 23:54:00
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-06 17:18:08
舟之帆: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-07-19 21:42:51
一般来说不至于溶解那么多次还会有絮状沉淀啊!
1 电泳液是新配的吗?电泳液如果有沉淀就要配新的了
2 如3楼说的,瓶子要干净,琼脂粉在煮之前先搅匀,我自己配胶时,往往是先倒缓冲液,再放琼脂糖,这样会比较容易均匀分散
3 你跑了多久呢?我看你的marker怎么好像有降解的样子,一般marker的设计都会在某个分子量上的量比较大,从而方便我们比对、判断分子量大小,你的每个marker都是到后面就很亮,像有降解。建议跑的时间比较长的话,在电泳槽下放些冰袋。
4 从这个图片来看,胶的确没有配好,可能胶孔有损伤,或有气泡。
5 电泳时,把胶放在电泳槽正中间,那里的电压电流应该比较稳定。
思路决定出路。。。
5楼2013-07-06 17:11:43
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pengyaotc

铁虫 (小有名气)

琼脂糖高温一分钟溶解沸腾至透明,不能长时间煮
6楼2014-01-15 21:37:44
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