24小时热门版块排行榜    

查看: 4477  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

鸡鸣不已

铜虫 (正式写手)


[求助] 蛋白质等电点沉淀之后怎么重新溶解

现在在做蛋白质纯化,想过阳离子交换柱,因为蛋白质稳定pH要>4.5,等电点预测在5.1左右,故选用pH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲液,但加了之后就浑浊了,大侠们,我该怎么办
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

marmot218

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以尝试加一些表活、去污剂之类的 或者低浓度的变性剂 对有些蛋白有稳定作用
9楼2013-07-03 09:17:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-02 18:52:58
鸡鸣不已: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢,我再看看 2013-07-03 14:33:48
是否精确测算过蛋白等电点?因为你的蛋白稳定要>4.5,用4.6的缓冲液去置换,蛋白会先经过5.1的等电点沉淀,然后继续加会稍许变清,但是因为距离等电点较近,所以不会变的很清,就是说不一定会完全溶解。楼主需要考虑一下精确测量蛋白的等电点,然后选择合适的pH缓冲液。另外,层析类型也需要考虑,是否一定要用阳离子交换?
2楼2013-07-02 11:03:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-02 18:53:04
鸡鸣不已: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢,我再看看 2013-07-03 14:34:01
我想问一下,你的蛋白是需要重新溶解,还是需要改进实验方法?

1. 如果是重新溶解,建议你变性溶解!选择尿素或者盐酸胍!
2.如果是改进实验方法,建议你先准确计算一下你的等电点,然后看看等电点是否很高?根据等电点做选择合适的离子柱!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
3楼2013-07-02 12:26:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

marmot218

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-02 18:53:19
鸡鸣不已: 金币+15, ★★★很有帮助, 谢谢,我再看看 2013-07-03 14:34:21
首先等电点要准确 然后为什么不能用阴离子交换呢 如果用阴离子交换 缓冲液的选择会增加很多
4楼2013-07-02 13:36:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302求调剂 +6 呼呼呼。。。。 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:56 by 星空星月
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[考研] 化学工程321分求调剂 +11 大米饭! 2026-03-15 14/700 2026-03-17 17:11 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
请填处理意见