| 查看: 1111 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
hua_geduo木虫 (正式写手)
|
[求助]
细胞培养的血清问题
|
||
| 细胞培养的血清500ml，没有完全融化我就把已经融化的部分进行了分装,拿来使用，是不是这样的血清不均匀?这样会不会对细胞有影响？这几天发现细胞总会脱落，会不会跟这个有关？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞培养 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有106人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 293A细胞培养出了问题
已经有10人回复
- 求教昆虫细胞培养问题
已经有7人回复
- 细胞加药时无血清培养吗
已经有15人回复
- 培养的MDCK细胞现在要更换血清的厂家，会有影响吗？急求，多谢大家相助！！
已经有3人回复
- HepG2细胞培养出现的问题
已经有6人回复
- 癌细胞培养问题
已经有17人回复
- 细胞培养中的问题
已经有11人回复
- 关于RPMI1640培养基
已经有11人回复
- 关于MCF-7细胞培养的问题
已经有12人回复
- 细胞培养相关问题 急！！！！！
已经有13人回复
- 【求助/交流】[急]细胞培养出现问题，大家看看是不是传说中的黑胶虫？
已经有9人回复
- 原代细胞培养，支原体污染问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】细胞培养污染问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】请教细胞培养的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】细胞培养的问题
已经有9人回复
- 求助血管内皮细胞培养问题（急）
已经有6人回复
3楼2013-06-30 21:20:25
myprayer
专家顾问 (著名写手)
- MolEPI: 12
- 应助: 81 (初中生)
- 贵宾: 2.822
- 金币: 32408.7
- 散金: 1696
- 红花: 159
- 沙发: 3
- 帖子: 2275
- 在线: 822.5小时
- 虫号: 1759711
- 注册: 2012-04-16
- 专业: 生物力学与生物流变学
- 管辖: 生物医药区
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-06-30 16:21:41
hua_geduo: 金币+3, ★有帮助 2013-07-01 20:55:18
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-06-30 16:21:41
hua_geduo: 金币+3, ★有帮助 2013-07-01 20:55:18
|
这个是细胞培养的一般方法，大概就是这个流程吧 具体的你的问题我再给你说一下 培养基的配置那DMEM为例 先是溶解相应的碳酸氢钠，然后加入培养基，等充分溶解之后过滤，过滤最好都到无菌环境中进行， PVDF 0.22um的材质过滤器 然后将你所用的血清加入到已经过滤好的培养基中，稍微轻轻的摇晃让其均匀，然后分装在50ML的离心管中这步你看实验室需求了，这样分装的目的能够减少整体污染。 配置培养基大概就是这样子的。 再来说说你的问题 你说细胞脱落，是细胞贴壁贴的不好吗？这个要看你具体是什么细胞了。 下面给你说的是细胞培养的大概步骤 感觉你说的问题就是没有搞清楚流程，没见过直接用血清那样子用的 1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上; 2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上; 3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物.分装后置-20度保存; 4.消化液(pH7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存; 5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌).至少每月一次. 6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作时注意无菌台内空间层次.手及物品不要在暴露的瓶口上方来往,如果数量较多,培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作,瓶与瓶之间应相隔一定的距离,开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧,开开后应用灯先烧口,然后烧盖.用完后同样操作.整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点. 复苏: 1. 应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-37.5度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化. 2. 2.在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内,约5ml左右,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养并内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养. 传代: 1.贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入完全培养基后继续培养或实验. 悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度可先离心500rpm,5min后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养. [ Last edited by myprayer on 2013-6-30 at 16:02 ] |
2楼2013-06-30 16:00:20
hua_geduo
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1741.2
- 散金: 85
- 红花: 4
- 帖子: 416
- 在线: 207.7小时
- 虫号: 2114661
- 注册: 2012-11-08
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-07-01 20:56:10
10