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ctbctbctb

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于解淀粉芽孢杆菌基因敲除问题 已有2人参与

本人在做解淀粉芽孢杆菌的基因敲除,用的是热敏型质粒PVS7, 左右同源臂加起来大小为1400bp的片段, 将该片段和PVS7连接成重组质粒, 经酶切和电泳验证, 片段大小正确且只有1条带,但转化到解淀粉芽孢杆菌以后, 刚转化的重组菌做菌落PCR,发现有两条带,1条为目的片段1400bp,还有1条在1000bp左右; 而且重组菌传代后, 只有1000bp的一条带, 1400bp的带缺消失了. 用引物扩增原始菌和空质粒并没有1000bp的片段.
请问各位高手,究竟是什么原因呢?
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lyl4840361

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

质粒图?你转化用的电转还是化学转化?
2楼2015-01-14 11:04:47
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why9639

木虫 (正式写手)

维斯特洛大陆守门员

请问你用的是什么转化方法啊?我也在做解淀粉芽孢杆菌的转化。一直没成功。谢谢!
十有九人堪白眼,百无一用是书生
3楼2016-03-02 15:26:58
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天宇201266

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by why9639 at 2016-03-02 15:26:58
请问你用的是什么转化方法啊?我也在做解淀粉芽孢杆菌的转化。一直没成功。谢谢!

你好,请问你的解淀粉芽孢杆菌有转化出来吗?我最近也一直做这个转化一直没转化出来,有没有什么建议,谢谢?
在路上。。。
4楼2018-07-06 09:31:38
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天宇201266

金虫 (正式写手)

你好,请问你的解淀粉芽孢杆菌有转化出来吗?我最近也一直做这个转化一直没转化出来,有没有什么建议,谢谢?
在路上。。。
5楼2018-07-06 09:31:47
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why9639

木虫 (正式写手)

维斯特洛大陆守门员

引用回帖:
4楼: Originally posted by 天宇201266 at 2018-07-06 09:31:38
你好,请问你的解淀粉芽孢杆菌有转化出来吗?我最近也一直做这个转化一直没转化出来,有没有什么建议,谢谢?...

参照地衣芽孢杆菌的转化方法,不过效率很低
十有九人堪白眼,百无一用是书生
6楼2018-07-10 10:28:17
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小龙基因

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

内容已删除
7楼2019-07-21 00:17:39
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