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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于解淀粉芽孢杆菌基因敲除问题
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ctbctbctb

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于解淀粉芽孢杆菌基因敲除问题 已有2人参与

本人在做解淀粉芽孢杆菌的基因敲除,用的是热敏型质粒PVS7, 左右同源臂加起来大小为1400bp的片段, 将该片段和PVS7连接成重组质粒, 经酶切和电泳验证, 片段大小正确且只有1条带,但转化到解淀粉芽孢杆菌以后, 刚转化的重组菌做菌落PCR,发现有两条带,1条为目的片段1400bp,还有1条在1000bp左右; 而且重组菌传代后, 只有1000bp的一条带, 1400bp的带缺消失了. 用引物扩增原始菌和空质粒并没有1000bp的片段.
请问各位高手,究竟是什么原因呢?
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1楼 2013-06-28 00:13:15
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why9639

木虫 (正式写手)

维斯特洛大陆守门员
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天宇201266 at 2018-07-06 09:31:38
你好，请问你的解淀粉芽孢杆菌有转化出来吗？我最近也一直做这个转化一直没转化出来，有没有什么建议，谢谢？...

参照地衣芽孢杆菌的转化方法，不过效率很低
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十有九人堪白眼，百无一用是书生
6楼2018-07-10 10:28:17
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lyl4840361

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

质粒图？你转化用的电转还是化学转化？
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2楼2015-01-14 11:04:47
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why9639

木虫 (正式写手)

维斯特洛大陆守门员
请问你用的是什么转化方法啊？我也在做解淀粉芽孢杆菌的转化。一直没成功。谢谢！
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十有九人堪白眼，百无一用是书生
3楼2016-03-02 15:26:58
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天宇201266

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by why9639 at 2016-03-02 15:26:58
请问你用的是什么转化方法啊？我也在做解淀粉芽孢杆菌的转化。一直没成功。谢谢！

你好，请问你的解淀粉芽孢杆菌有转化出来吗？我最近也一直做这个转化一直没转化出来，有没有什么建议，谢谢？
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在路上。。。
4楼2018-07-06 09:31:38
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