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关于解淀粉芽孢杆菌基因敲除问题 已有2人参与
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本人在做解淀粉芽孢杆菌的基因敲除,用的是热敏型质粒PVS7, 左右同源臂加起来大小为1400bp的片段, 将该片段和PVS7连接成重组质粒, 经酶切和电泳验证, 片段大小正确且只有1条带,但转化到解淀粉芽孢杆菌以后, 刚转化的重组菌做菌落PCR,发现有两条带,1条为目的片段1400bp,还有1条在1000bp左右; 而且重组菌传代后, 只有1000bp的一条带, 1400bp的带缺消失了. 用引物扩增原始菌和空质粒并没有1000bp的片段. 请问各位高手,究竟是什么原因呢? |
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2楼2015-01-14 11:04:47
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10