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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于细胞计数板的问题
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above000

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于细胞计数板的问题 已有1人参与

请假各位前辈一个问题，为什么资料里的计数方法跟我们实验室的计数方法有出入，资料里是看中间的方格，而我们这是看四周的那四个方格，合理的计数方法应该是怎么样的？
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穷且益坚
1楼 2013-06-19 13:47:07
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
above000(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:10:13
我是数边上四个方格（方格里有16小格），取平均数后*1000
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你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2013-06-19 14:10:00
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myprayer

专家顾问 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-06-19 18:30:35
1949stone: MolEPI+1, ok 2013-06-20 09:14:49
小虫子要看好自己的 chamber  count blood cell 是什么牌子的，什么标准规格的，如果和我下面提到你的一样，你可以参考一下
细胞计数
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作：
一.准备工作：
取一瓶传代的细胞，按照《传代细胞培养（消化法）》中的传代方法繁殖细胞，待长成单层后以被使用。
二.细胞悬液制备：
细胞悬液的制备方法是用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液或PBS等平衡盐溶液），吹打制成待测细胞悬液。
三.细胞计数：
1.盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。
2.制备计数用的细胞悬液：用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中，加入5滴台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑，活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。
3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
4.统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大铬（每个大格含有16个中铬）中没有被染液染上色的细胞数目。
5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度：
（细胞悬液的细胞数）/ml＝ （ 四个大格子细胞数/4) ×2×104
说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1：1稀释。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3
四.细胞计数要点：
1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；
2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。
3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确；
4. 数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。
5. 操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
五.初学者易犯的错误：
1. 计数前未将待测悬液吹打均匀。
2. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。
3. 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。
期待你的好结果
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3楼2013-06-19 17:13:41
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xiangyu9356

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2013-06-19 14:10:00
我是数边上四个方格（方格里有16小格），取平均数后*1000

取平均数后应该*10000
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满堂花醉三千客，更无一人是知音。
4楼2013-06-20 09:20:02
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above000

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-19 17:13:41
小虫子要看好自己的 chamber  count blood cell 是什么牌子的，什么标准规格的，如果和我下面提到你的一样，你可以参考一下
细胞计数
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的 ...

非常感谢，还想问一下，为什么有的书上写的计数方法是数中间那个方格？
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穷且益坚
5楼2013-06-20 19:10:33
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云子Susan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by above000 at 2013-06-20 19:10:33
非常感谢，还想问一下，为什么有的书上写的计数方法是数中间那个方格？...

两种方法都是可行的，中间和四角都可以作为计数区域。中间的计数室跟四个角的大格一般大。只要注意计算公时，最后取平均值时，计算到到每个大格面积内（1mm×1mm×0.1mm）的细胞个数即可。然后×10000×稀释倍数，得到样品每ml细胞数。另外，也有人提到我们要尽量保证数出来的细胞总数要大于100个，但是也不可以太多，否则结果容易出现误差，因此在进行细胞计数时可以根据细胞密度来确定计数的方格总数。也就是说，浓度比较低时可以数四个角，浓度很高时，可以数中间。
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6楼2014-12-10 09:59:07
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