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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 有关细胞计数计算的一个问题
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davidsailing

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有关细胞计数计算的一个问题已有1人参与

刚开始做实验，要用到细胞计数板，网上和论坛里已经有不少关于细胞计数步骤方法的帖子，对于这些已经不陌生了，在这里想咨询一下各位老师有关最后细胞计数计算的一个问题：
我已经了解到的资料：
1、细胞计数板确实有25x16和16x25的规格，25x16的计数应取为四个角+中央共5个中格来计数，16x25的应该取四个角共4个中格来计数；
2、细胞计数板上计数室的体积一般为1mmx1mmx0.1mm=0.1mm?（不考虑2mmx2mmx0.1mm这种我没有见过的计数板规格）
3、计数时加样一般取10μl左右，注意操作
4、计数时掌握”计上不计下，计左不计右“的原则
我查阅到和通过老师师兄们口述的计算方法（以16x25为例）：
1、以此帖为例http://www.dxy.cn/bbs/topic/6546115
（细胞悬液的细胞数）/ml＝ （ 四个格子细胞数/4) ×2×10^4
说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1：1稀释。
公式中乘以10^4因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm^3 而 1ml＝1000mm^3
（注：此种方法我们实验室也在用。）
2、以此帖为例http://wenku.baidu.com/view/93d9708bd0d233d4b14e6954.html （1）16×25 ：将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算： 个数/mL=100个小方格计数/ 100 ×400×10000× 稀释倍数
（2）25×16 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算：个数/mL=80个小方格计数/ 80 ×400×10000× 稀释倍数

我认为第二种计数方法是比较正确的，因为毕竟要用整个计数室（0.1mm?）的细胞数来换算。如果按第一种方法是不是可以认为取了计数区四个角的细胞取平均值得到一个中格子的细胞这样就代表了整个计数区的所有细胞量呢？这样应该是错误的吧？
我也看到有些人说，细胞计数板的计数只是一个估计，知道数量级就可以了，但是第一种方法和第二种方法相比应该可以差到一个数量级以上，应该不可以当做误差而是错误了吧？
因为没有人来指导下究竟该怎么裁决这两种方法，虽然是个很小的问题，但是我觉得应该明确一下，所以想请问下各位老师有什么看法？如果我在对计数板的使用根本上就有错误也请老师批评指正。谢谢大家。
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1楼2012-11-08 19:22:51
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zllkeyan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也觉得第一种方法是错误的。0.1mm3应该指的是一个计数室的体积，而不是一个大格的体积，所以应该用整个计数室的细胞量乘以计数室的体积。
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2楼2012-11-09 21:13:22
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zllkeyan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我做计数的时候，是用移液器将细胞液从盖玻片边缘打进去的，不是滴一滴在边缘利用虹吸进入，这样会不会对计数有影响？
另外，两个计数室中间的凹槽中有液体是不是会影响准确性呢？还是只要计数室两边的槽里没有液体就可以了？
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3楼2012-11-09 21:26:58
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德吉蔷薇

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前也做过，不过有点记不清楚了。祝你早日解开疑惑！
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4楼2012-11-10 17:58:51
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davidsailing

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zllkeyan at 2012-11-09 21:13:22
我也觉得第一种方法是错误的。0.1mm3应该指的是一个计数室的体积，而不是一个大格的体积，所以应该用整个计数室的细胞量乘以计数室的体积。

我也这么觉得，但是好像我所看到的各种论坛里面大家都是用第一种计数的，但是也没有人说这是为什么.....
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5楼2012-11-11 22:05:08
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davidsailing

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zllkeyan at 2012-11-09 21:26:58
我做计数的时候，是用移液器将细胞液从盖玻片边缘打进去的，不是滴一滴在边缘利用虹吸进入，这样会不会对计数有影响？
另外，两个计数室中间的凹槽中有液体是不是会影响准确性呢？还是只要计数室两边的槽里没有液体 ...

我觉得所有凹槽里都不该有液体，因为你打进去的细胞悬液或者其他微生物悬液应该是只充满计数区的.....如果液体不蔓延出盖玻片到凹槽里就还好，应该主要就是不渗出、不产生气泡....
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6楼2012-11-11 22:07:27
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davidsailing

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德吉蔷薇 at 2012-11-10 17:58:51
以前也做过，不过有点记不清楚了。祝你早日解开疑惑！

多谢~主要是想求大师谁能指点一下....
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7楼2012-11-11 22:08:02
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davidsailing

铁虫 (初入文坛)
今天终于有人给我答疑解惑了~
第一种应该是对的，因为整个网格里共有九个大格子，第二种方法其实是取中间一个密集的有小格子的作为计数区，而第一种是取九个大格子里面的四个角做为计数区，这样的其实是等价的，但是在单次计算的时候我觉得应该是取四个大格子的平均值更准确一些，而且这样数起来不会被密集的小格子给遮住视线，所以可能这就是为什么大家都这么数的原因。
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8楼2012-11-11 22:26:04
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davidsailing

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zllkeyan at 2012-11-09 21:13:22
我也觉得第一种方法是错误的。0.1mm3应该指的是一个计数室的体积，而不是一个大格的体积，所以应该用整个计数室的细胞量乘以计数室的体积。

今天终于有人给我答疑解惑了~
主要是忘记实验诊断的时候是怎么用细胞计数板的了。其实第一种应该是对的，因为整个网格里共有九个大格子，第二种方法其实是取中间一个密集的有小格子的作为计数区，而第一种是取九个大格子里面的四个角做为计数区，这样的其实是等价的，但是在单次计算的时候我觉得应该是取四个大格子的平均值更准确一些，而且这样数起来不会被密集的小格子给遮住视线，所以可能这就是为什么大家都这么数的原因。
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9楼2012-11-11 22:33:05
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不要co2

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第一个是错的 计算原则就是数量除以体积啊 应该是互相对照的
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10楼2014-05-08 10:29:39
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