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davidsailing

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 有关细胞计数计算的一个问题已有1人参与

刚开始做实验，要用到细胞计数板，网上和论坛里已经有不少关于细胞计数步骤方法的帖子，对于这些已经不陌生了，在这里想咨询一下各位老师有关最后细胞计数计算的一个问题：
我已经了解到的资料：
1、细胞计数板确实有25x16和16x25的规格，25x16的计数应取为四个角+中央共5个中格来计数，16x25的应该取四个角共4个中格来计数；
2、细胞计数板上计数室的体积一般为1mmx1mmx0.1mm=0.1mm?（不考虑2mmx2mmx0.1mm这种我没有见过的计数板规格）
3、计数时加样一般取10μl左右，注意操作
4、计数时掌握”计上不计下，计左不计右“的原则
我查阅到和通过老师师兄们口述的计算方法（以16x25为例）：
1、以此帖为例http://www.dxy.cn/bbs/topic/6546115
（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个格子细胞数/4) ×2×10^4
说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1：1稀释。
公式中乘以10^4因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm^3 而 1ml＝1000mm^3
（注：此种方法我们实验室也在用。）
2、以此帖为例http://wenku.baidu.com/view/93d9708bd0d233d4b14e6954.html （1）16×25 ：将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算：个数/mL=100个小方格计数/ 100 ×400×10000× 稀释倍数
（2）25×16 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算：个数/mL=80个小方格计数/ 80 ×400×10000× 稀释倍数

我认为第二种计数方法是比较正确的，因为毕竟要用整个计数室（0.1mm?）的细胞数来换算。如果按第一种方法是不是可以认为取了计数区四个角的细胞取平均值得到一个中格子的细胞这样就代表了整个计数区的所有细胞量呢？这样应该是错误的吧？
我也看到有些人说，细胞计数板的计数只是一个估计，知道数量级就可以了，但是第一种方法和第二种方法相比应该可以差到一个数量级以上，应该不可以当做误差而是错误了吧？
因为没有人来指导下究竟该怎么裁决这两种方法，虽然是个很小的问题，但是我觉得应该明确一下，所以想请问下各位老师有什么看法？如果我在对计数板的使用根本上就有错误也请老师批评指正。谢谢大家。

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