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NEVER000

木虫 (小有名气)

[求助] PCR及引物设计求助

我想将我的目的基因中的一段（约45bp）,直接用外源基因替换（36bp）怎样设计引物？谢谢
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1楼 2013-05-29 19:11:17
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-05-29 19:56:24
NEVER000: 金币+20, ★★★很有帮助, 非常感谢 2013-06-11 21:27:30
这个原理和制造点突变是一样的, 你的基因英爱已经在一个质粒里面了吧? 参考site-directed mutagenesis.
连个引物方向背对背, 它们的5'分别识别要改的那45b两侧, 它们的3'则是要替换的那36bp. 这36bp不用全部出现在引物序列里, 但是两个引物之间必须有大概20bp重叠.
如果基因序列还没有克隆到质粒里, 那就考虑融合PCR.
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2楼2013-05-29 19:21:41
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NEVER000

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-29 19:21:41
这个原理和制造点突变是一样的, 你的基因英爱已经在一个质粒里面了吧? 参考site-directed mutagenesis.
连个引物方向背对背, 它们的5'分别识别要改的那45b两侧, 它们的3'则是要替换的那36bp. 这36bp不用全部出现在 ...

你好！我还是不太懂 ，能加你QQ好友 请教一下吗？
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3楼2013-06-11 21:28:22
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