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yanfang2012

木虫 (著名写手)


[交流] 核酸的HPLC有人做过吗

要测酶活性,底物和产物是RNA,用HPLC测产物的量,不知道有哪些注意事项,有做过的虫子分享一下经验吗

[ 来自小组 生物医药家族 ]

[ Last edited by yanfang2012 on 2013-5-26 at 09:34 ]
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)


2楼2013-05-25 21:31:45
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asdry

木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
祝楼主诸事顺利,心想事成!
3楼2013-05-25 22:00:07
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xiedt

金虫 (著名写手)


祝福,祝福,祝福,抢沙发
4楼2013-05-25 22:09:45
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silence18

金虫 (正式写手)


★ ★
yanfang2012: 金币+1 2013-05-27 15:20:51
yanfang2012: 金币+1 2013-06-02 10:54:57
可以参考USP啊,我果断时间也要做这个事情,还要做方法学验证
5楼2013-05-25 23:18:31
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yangxiaohai

铁杆木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
问题提得比较含糊,能不能明确些?
6楼2013-05-26 00:07:36
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TrickyVick

金虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yanfang2012: 金币+1 2013-06-02 10:55:26
MALDI或跑GEL再提取+nano drop不行吗? HPLC的话用RP柱子,注意事项的话,除了小心handle RNA其他的没什么大事了吧?
7楼2013-05-27 12:12:26
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yanfang2012

木虫 (著名写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by TrickyVick at 2013-05-27 12:12:26
MALDI或跑GEL再提取+nano drop不行吗? HPLC的话用RP柱子,注意事项的话,除了小心handle RNA其他的没什么大事了吧?

nano drop 不适合我做的东西
8楼2013-05-27 14:31:27
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yanfang2012

木虫 (著名写手)


引用回帖:
5楼: Originally posted by silence18 at 2013-05-25 23:18:31
可以参考USP啊,我果断时间也要做这个事情,还要做方法学验证

USP里应该没有我要做的东西,而且药典毕竟不适合所有实验
9楼2013-05-27 15:20:25
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TrickyVick

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yanfang2012: 金币+2 2013-06-04 08:54:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-05-27 14:31:27
nano drop 不适合我做的东西...

那就不好弄了啊,反应没啥副反应的话把底物过一遍做个control,再把反应后的过一遍看看多出来哪个。有产物更好,做positive control。 从retention time上看是哪个物质,从峰强度算相对amount。 另外一些rule of thumb, 一般长一点的核酸后面出来,短一点的前面出。

另外你不管怎么样都要跑胶吧?不然不好证明你RNA没有degrade,这个要小心的。DEPC water, 口罩,眼镜,头套,专门的实验服,杀RNA酶的清洁剂啥的。

严格一点的paper还是会要你跑胶或做MS或者测序产物的
10楼2013-06-03 15:19:28
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yanfang2012

木虫 (著名写手)


引用回帖:
10楼: Originally posted by TrickyVick at 2013-06-03 15:19:28
那就不好弄了啊,反应没啥副反应的话把底物过一遍做个control,再把反应后的过一遍看看多出来哪个。有产物更好,做positive control。 从retention time上看是哪个物质,从峰强度算相对amount。 另外一些rule of t ...

我做的是c-di-GMP,目前看到的文献没有考虑稳定性问题,应该比较稳定,我再查一下,谢谢你的提醒。HPLC方面,底物和产物的标准品都已经购买到了
11楼2013-06-04 09:26:09
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