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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 核酸的HPLC有人做过吗
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

[交流] 核酸的HPLC有人做过吗

要测酶活性，底物和产物是RNA,用HPLC测产物的量，不知道有哪些注意事项，有做过的虫子分享一下经验吗

[ 来自小组 生物医药家族 ]

[ Last edited by yanfang2012 on 2013-5-26 at 09:34 ]
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1楼 2013-05-25 20:54:18
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)
Good health
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2楼2013-05-25 21:31:45
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asdry

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
祝楼主诸事顺利，心想事成！
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3楼2013-05-25 22:00:07
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xiedt

金虫 (著名写手)
祝福，祝福，祝福，抢沙发
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4楼2013-05-25 22:09:45
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silence18

金虫 (正式写手)
★ ★
yanfang2012: 金币+1 2013-05-27 15:20:51
yanfang2012: 金币+1 2013-06-02 10:54:57
可以参考USP啊,我果断时间也要做这个事情，还要做方法学验证
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5楼2013-05-25 23:18:31
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yangxiaohai

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问题提得比较含糊，能不能明确些？
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6楼2013-05-26 00:07:36
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TrickyVick

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yanfang2012: 金币+1 2013-06-02 10:55:26
MALDI或跑GEL再提取+nano drop不行吗? HPLC的话用RP柱子，注意事项的话，除了小心handle RNA其他的没什么大事了吧？
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7楼2013-05-27 12:12:26
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yanfang2012

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by TrickyVick at 2013-05-27 12:12:26
MALDI或跑GEL再提取+nano drop不行吗? HPLC的话用RP柱子，注意事项的话，除了小心handle RNA其他的没什么大事了吧？

nano drop 不适合我做的东西
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8楼2013-05-27 14:31:27
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yanfang2012

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by silence18 at 2013-05-25 23:18:31
可以参考USP啊,我果断时间也要做这个事情，还要做方法学验证

ＵＳＰ里应该没有我要做的东西，而且药典毕竟不适合所有实验
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9楼2013-05-27 15:20:25
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TrickyVick

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yanfang2012: 金币+2 2013-06-04 08:54:21
引用回帖:
8楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-05-27 14:31:27
nano drop 不适合我做的东西...

那就不好弄了啊，反应没啥副反应的话把底物过一遍做个control，再把反应后的过一遍看看多出来哪个。有产物更好，做positive control。 从retention time上看是哪个物质，从峰强度算相对amount。 另外一些rule of thumb， 一般长一点的核酸后面出来，短一点的前面出。

另外你不管怎么样都要跑胶吧？不然不好证明你RNA没有degrade，这个要小心的。DEPC water， 口罩，眼镜，头套，专门的实验服，杀RNA酶的清洁剂啥的。

严格一点的paper还是会要你跑胶或做MS或者测序产物的
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10楼2013-06-03 15:19:28
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yanfang2012

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by TrickyVick at 2013-06-03 15:19:28
那就不好弄了啊，反应没啥副反应的话把底物过一遍做个control，再把反应后的过一遍看看多出来哪个。有产物更好，做positive control。 从retention time上看是哪个物质，从峰强度算相对amount。 另外一些rule of t ...

我做的是c-di-GMP,目前看到的文献没有考虑稳定性问题，应该比较稳定，我再查一下，谢谢你的提醒。HPLC方面，底物和产物的标准品都已经购买到了
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11楼2013-06-04 09:26:09
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