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huahua8572

木虫 (初入文坛)

[求助] HPLC峰形

最近在做一化合物的HPLC,出现了以下的现象,百思不得其解,望能有高手指点。
(1)化合物为盐酸盐,当流动相为水-0.1%甲酸-乙腈系统时,HPLC图谱中出现两个峰(图1),且两峰比例在刚配完样进样分析时约为15:85,之后一直稳定在25:75。为什么会出现两个色谱峰呢?

(2)同一化合物,当流动相为醋酸铵溶液(0.1%三乙胺,pH=6.2)-乙腈时,HPLC图谱如下(图2),出现一个鼓起来的峰,对应空白溶剂中没有该峰,这个鼓包该如何解释呢?可能是由什么引起的呢?

希望大家帮忙对以上两个现象进行分析讨论指点,万分感谢啊!!!

图2



图1
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ltxin2009

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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1、试试用流动相溶解样品;
2、试试不同的波长;
3、试剂有时会影响。
2楼2012-06-26 08:44:00
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snowrabbit

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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样品纯吗?柱子平衡好了吗?该样品分析了几次?确定该数据重复吗?
图一中前面峰会不会是溶剂峰,如果不是溶剂峰,那保留时间也太短了。图二中包括鼓起来的峰,共三个峰。个人觉得色谱条件没稳定好。
3楼2012-06-26 08:47:52
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xiaoxiazizx

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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其中肯定有溶剂峰吧,你做的化合物不知道纯不纯,有可能有杂质吧
刻意去找的东西,往往是找不到的。天下万物的来和去,都有他的时间。
4楼2012-06-26 08:56:49
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流,欢迎常来哦。 2012-06-27 08:20:21
1.样品可能有杂质
2.样品放置或者配置过程中出现分解或氧化现象
3.用流动相溶解样品
4.考虑这个化合物有没有同分异构体,不过极性相差这么大,也不大可
   能是同分异构体的事情
5.化合物容易氧化,要在分析过程中尽量采用配置后马上分析的原则
5楼2012-06-26 09:17:13
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流,欢迎常来哦。 2012-06-27 08:20:27
出峰太早,有可能是溶剂峰,也有可能是杂质穿透
6楼2012-06-26 12:04:13
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by huahua8572 at 2012-06-26 15:10:49
跟空白溶剂比对过了 不是溶剂峰。请教一下 什么是杂质穿透呢?...

就是我想你的化合物应该是不纯的,里面含有其他东西,或降解了。
8楼2012-06-26 15:15:08
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逍遥天使

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
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痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流,欢迎常来哦。 2012-06-27 08:20:35
1,看看结构是不是有互变异构体,互变异构体在一定PH下出两个峰,以前做过类似分析!
2。除非你的产品部稳定,大包应该是杂质!可以做个核磁看看你!
努力不一定成功!不努力永远不会成功!
9楼2012-06-26 16:25:01
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.首先分析条件不是最佳!出峰太靠后
2.图1中前面那个鼓包,应该不是本次进样中峰,可能是上一针的残留
3.可以重复多次进样,如果每次都有,那么考虑加入缓冲液来改善峰形
4.图2中的前面的峰如果空白没有,那会不会样品中的某物质和流动相反应生成的新物质?、
10楼2013-03-02 15:27:10
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普通回帖

huahua8572

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by sspxiaoji at 2012-06-26 12:04:13
出峰太早,有可能是溶剂峰,也有可能是杂质穿透

跟空白溶剂比对过了 不是溶剂峰。请教一下 什么是杂质穿透呢?
7楼2012-06-26 15:10:49
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