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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 重组牛胰蛋白酶在毕赤酵母中的表达
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anruoka

木虫 (正式写手)

[求助] 重组牛胰蛋白酶在毕赤酵母中的表达 已有1人参与

我们做的是重组牛胰蛋白酶，用的是毕赤酵母GS115
表达量比较低，western blot才能看见
怎么办呢
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我是一只好虫子
1楼 2013-05-25 13:07:27
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553173045

铜虫 (初入文坛)
靓女，有没有好的方法表达胰蛋白酶，能给个建议吗？我们也在研究胰蛋白酶，但表达一直很低很低。求帮忙
赞一下 回复此楼
没有完成不了的事，只有自己愿不愿意去做
9楼2015-02-06 14:39:31
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heroxuning

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问是什么载体的？如果是pPIC9K的，可以使用遗传霉素G418高抗筛选高拷贝，我们一般使用1.0,2.0,3.0,4.0mg/ml浓度
如果是pPICZaA系列，可以考虑 用高浓度Zecion梯度平板筛选高拷贝，
理论上拷贝数多，表达量会高一点，因蛋白而异
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2楼2013-05-25 20:24:40
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anruoka

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heroxuning at 2013-05-25 20:24:40
请问是什么载体的？如果是pPIC9K的，可以使用遗传霉素G418高抗筛选高拷贝，我们一般使用1.0,2.0,3.0,4.0mg/ml浓度
如果是pPICZaA系列，可以考虑 用高浓度Zecion梯度平板筛选高拷贝，
理论上拷贝数多，表达量会高一 ...

pPICZaA、B、C有什么区别
Zeocin浓度怎么选择
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我是一只好虫子
3楼2013-05-25 21:25:41
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heroxuning

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by anruoka at 2013-05-25 21:25:41
pPICZaA、B、C有什么区别
Zeocin浓度怎么选择...

没什么区别，都是一系列的，中间一些限制性内切酶酶切位点不一样，我们实验室倒梯度平板，先到10mg/ml Zeocin 平板斜面，然后待其凝固，再在高抗斜面上倒无抗固体培养基，使平板保持水平。这样抗生素分子扩散就形成从0---10mg/ml浓度渐变的平板了，在其上涂转化平板上用水冲洗的菌液，长3-4day即可，
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4楼2013-05-25 21:52:20
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