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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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anruoka

木虫 (正式写手)

[求助] 重组牛胰蛋白酶在毕赤酵母中的表达 已有1人参与

我们做的是重组牛胰蛋白酶,用的是毕赤酵母GS115
表达量比较低,western blot才能看见
怎么办呢
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我是一只好虫子
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anruoka

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by heroxuning at 2013-05-25 20:24:40
请问是什么载体的?如果是pPIC9K的,可以使用遗传霉素G418高抗筛选高拷贝,我们一般使用1.0,2.0,3.0,4.0mg/ml浓度
如果是pPICZaA系列,可以考虑 用高浓度Zecion梯度平板筛选高拷贝,
理论上拷贝数多,表达量会高一 ...

pPICZaA、B、C有什么区别
Zeocin浓度怎么选择
我是一只好虫子
3楼2013-05-25 21:25:41
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heroxuning

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问是什么载体的?如果是pPIC9K的,可以使用遗传霉素G418高抗筛选高拷贝,我们一般使用1.0,2.0,3.0,4.0mg/ml浓度
如果是pPICZaA系列,可以考虑 用高浓度Zecion梯度平板筛选高拷贝,
理论上拷贝数多,表达量会高一点,因蛋白而异
2楼2013-05-25 20:24:40
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heroxuning

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by anruoka at 2013-05-25 21:25:41
pPICZaA、B、C有什么区别
Zeocin浓度怎么选择...

没什么区别,都是一系列的,中间一些限制性内切酶酶切位点不一样,我们实验室倒梯度平板,先到10mg/ml Zeocin 平板斜面,然后待其凝固,再在高抗斜面上倒无抗固体培养基,使平板保持水平。这样抗生素分子扩散就形成从0---10mg/ml浓度渐变的平板了,在其上涂转化平板上用水冲洗的菌液,长3-4day即可,
4楼2013-05-25 21:52:20
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wujunyi354

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

尝试下调节诱导后PH
5楼2013-12-06 13:32:54
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