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776142

金虫 (正式写手)


[交流] DNA电泳图分析求助

跑了很多次从DH5a大肠杆菌中用合成的萃取材料分离出的DNA电泳,总是出现问题,操作是按照碱法裂解的方法配制溶液1,2,3同时在1中加入RNA酶,然后用合成的材料吸附洗脱,但在200处左右总出现很亮的条带,加大RNA酶的浓度也无法解决,并且跑出的DNA条带与试剂盒得到的最亮条带也不在一条直线上,不知道是不是我用1M的NaCl洗脱后的结果,希望明白的朋友们能够帮忙解决下,不尽感激。
DNA电泳图分析求助
图片3.jpg



[ Last edited by 776142 on 2013-5-21 at 10:02 ]
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
OD值纯DNA在1.8左右,如果在1.9~2.0之间说明有RNA污染,你的大于2,而且加有RNase,排除操作失误,或比色杯污染,有可能就是DNA溶解,试着最后用水洗脱,而不用盐洗脱。
31楼2014-09-28 22:59:25
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youngker918

金虫 (正式写手)


★ ★
776142(金币+1): 谢谢参与
776142(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-21 13:18:57
有可能啊,建议你氯化钠洗脱后再做下脱盐
3楼2013-05-21 10:49:53
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孤城一片

木虫 (小有名气)


★ ★
776142(金币+1): 谢谢参与
776142(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-05-22 00:59:58
我以前做的时候也是这样,我一开始也是RNA酶加的量很大,后来我一般是大提,然后做一次回收,效果还行
6楼2013-05-21 14:04:21
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776142

金虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by youngker918 at 2013-05-21 10:49:53
有可能啊,建议你氯化钠洗脱后再做下脱盐

能告诉下具体的除盐过程吗,刚接触这一领域不太懂,谢谢。我是用300微升的1M氯化钠洗脱的,
7楼2013-05-21 14:17:39
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