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yaowang1991

铁虫 (小有名气)

[求助] ELISA背景值高

各位大侠:
   小弟最近在做ELISA,用HRP标记的抗HIS抗体当二抗,结果发现OD450在空白对照组的值很高,其他有一抗的组也基本都是背景值,我用的是阳性对照,不可能连阳性对照都是背景值吧。所以请问是什么问题。我的酶标二抗是按照说明书用含0.5%BSA 的PBS稀释的,空白OD450大概0.25。我手动洗的板,用0.05%Tween20的PBS洗的,一般洗7遍,每遍都会拍干然后再加新的。
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-05-16 22:46:24
yaowang1991: 金币+3 2013-05-16 23:11:57
ELISA中一般需要用到封闭液,建议封闭液 1%BSA-PBS-0.1%Tween20,封闭液主要用于:
1. 包被后封闭ELISA板
2.稀释样品(如果样品需要稀释)
3.稀释酶标抗体

应该可以很好控制背景
2楼2013-05-16 22:17:23
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yaowang1991

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-16 22:17:23
ELISA中一般需要用到封闭液,建议封闭液 1%BSA-PBS-0.1%Tween20,封闭液主要用于:
1. 包被后封闭ELISA板
2.稀释样品(如果样品需要稀释)
3.稀释酶标抗体

应该可以很好控制背景

请问所谓封闭Elisa板是用来做什么的?我的酶标二抗是2mg/ml再稀释800倍。是不是浓了点?封闭液我是直接倒掉再加一抗的。
3楼2013-05-16 23:11:20
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