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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ELISA背景值高
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yaowang1991

铁虫 (小有名气)

[求助] ELISA背景值高

各位大侠：
   小弟最近在做ELISA，用HRP标记的抗HIS抗体当二抗，结果发现OD450在空白对照组的值很高，其他有一抗的组也基本都是背景值，我用的是阳性对照，不可能连阳性对照都是背景值吧。所以请问是什么问题。我的酶标二抗是按照说明书用含0.5%BSA 的PBS稀释的，空白OD450大概0.25。我手动洗的板，用0.05%Tween20的PBS洗的，一般洗7遍，每遍都会拍干然后再加新的。
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1楼 2013-05-16 19:25:13
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-05-16 22:46:24
yaowang1991: 金币+3 2013-05-16 23:11:57
ELISA中一般需要用到封闭液，建议封闭液 1%BSA-PBS-0.1%Tween20,封闭液主要用于：
1. 包被后封闭ELISA板
2.稀释样品（如果样品需要稀释）
3.稀释酶标抗体

应该可以很好控制背景
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2楼2013-05-16 22:17:23
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yaowang1991

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2013-05-16 22:17:23
ELISA中一般需要用到封闭液，建议封闭液 1%BSA-PBS-0.1%Tween20,封闭液主要用于：
1. 包被后封闭ELISA板
2.稀释样品（如果样品需要稀释）
3.稀释酶标抗体

应该可以很好控制背景

请问所谓封闭Elisa板是用来做什么的?我的酶标二抗是2mg/ml再稀释800倍。是不是浓了点?封闭液我是直接倒掉再加一抗的。
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3楼2013-05-16 23:11:20
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