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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于MVLN-assay 中对照组 荧光值背景高的问题
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addison7805

金虫 (小有名气)

[求助] 关于MVLN-assay 中对照组 荧光值背景高的问题

各位大侠好，我刚接触细胞实验，就是在MVLN-assay中，用雌二醇诱导MVLN细胞，而（E2）暴露组的化学发光检测值不理想，文献中一般是7倍到10倍，而我做的是3倍到5倍，实验过程发现背景值即对照的化学发光也特别高，达到300000，而实验组1nME2所得化学发光值大约为1000000.想知道为什么背景值高，为什么诱导倍数达不到文献中的7-10倍？PS:正常情况下，对照组背景值应该是30000~50000，而我的是300000。
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1楼 2012-03-26 22:21:50
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addison7805

金虫 (小有名气)
有童鞋 大虾帮忙么？？？？？？
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2楼2012-03-27 20:13:44
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
顶下~
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3楼2012-03-28 10:17:11
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addison7805

金虫 (小有名气)
。。。。。。。。。。。。。。。。。
4楼2012-04-01 21:23:52
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chord

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
帖都发到这来了啊，再做做就可以出结果，国内很少用这个细胞的，是吧ZLZ
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5楼2012-04-03 10:30:47
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
6楼2012-04-03 15:10:42
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hanjian251

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
addison7805: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-03 21:31:18
你好！我也在做luc.诱导实验。自己做的稳转细胞株。
虽然我没用过此细胞，但还是冒然给出了些建议，仅供参考：
我感觉在整个实验过程中，很多因素都会影响最终的萤光信号。
首先需要明确的是：你用的细胞是别人用成熟了的细胞（必须是稳定转染的，若是顺转的则质粒可能拷贝数变了），严格按照别人的protocol是可以得到相应结果的，至少大差不差的。
若严格按照别的protocol做了，但结果有差异，想必一些环节没有注意：
1.细胞计数不够准确（当然了，现行的方法只有更准确，没有最准确），铺板细胞数目难以接近protocol里的；建议买个好点的全自动计数器；
2.细胞培养基需用无血清、去激素、无酚红的吧；
3.铺板或E2暴露之前应该要48h左右的无血清无激素培养基饥饿培养，暴露时间要控制好；
4.板子：最好用全黑板（减少假阳性），全白板最为常用；尽量不用壁不透明而底透明的板子；
5.仪器：用的检测仪器会影响结果的。promega的仪器最好且最灵敏（背景值可减去）；Berthold的专门测化学发光的也可以【以上仪器我都用过，并比较过的】；但是诸如MD的M5就差很多了，因为其检测模块设计不专业，不能准确记录各孔数据，孔间干扰显著！总之，专业的单纯检测化学发光的仪器应该都可以的。
6.提示，不论阳性还是阴性对照，坚决不能少！
多思考一下做的每个环节，推测一下，应该会找到问题的。
祝你实验顺利！   顺便问一句：此细胞株可否相赠或转卖？
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7楼2012-04-03 16:07:42
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addison7805

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hanjian251 at 2012-04-03 16:07:42:
你好！我也在做luc.诱导实验。自己做的稳转细胞株。
虽然我没用过此细胞，但还是冒然给出了些建议，仅供参考：
我感觉在整个实验过程中，很多因素都会影响最终的萤光信号。
首先需要明确的是：你用的细胞是别人 ...

谢谢你哈，你说的这些问题，我都注意了，完全是按照说明书上进行操作的。但是对照组的背景就是高，以前做过实验的师兄也不知道怎么回事。另外，我是在别的老师下面借用他们的细胞，听师姐说细胞是老板从国外带回来的。好像是仅供组内人员使用的，所以很不好意思。不能赠与或转卖。
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8楼2012-04-03 21:29:43
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