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addison7805金虫 (小有名气)
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[求助]
关于MVLN-assay 中对照组 荧光值背景高的问题
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| 各位大侠好，我刚接触细胞实验，就是在MVLN-assay中，用雌二醇诱导MVLN细胞，而（E2）暴露组的化学发光检测值不理想，文献中一般是7倍到10倍，而我做的是3倍到5倍，实验过程发现背景值即对照的化学发光也特别高，达到300000，而实验组1nME2所得化学发光值大约为1000000.想知道为什么背景值高，为什么诱导倍数达不到文献中的7-10倍？PS:正常情况下，对照组背景值应该是30000~50000，而我的是300000。 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
addison7805: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-03 21:31:18
感谢参与，应助指数 +1
addison7805: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-03 21:31:18
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你好！我也在做luc.诱导实验。自己做的稳转细胞株。 虽然我没用过此细胞，但还是冒然给出了些建议，仅供参考： 我感觉在整个实验过程中，很多因素都会影响最终的萤光信号。 首先需要明确的是：你用的细胞是别人用成熟了的细胞（必须是稳定转染的，若是顺转的则质粒可能拷贝数变了），严格按照别人的protocol是可以得到相应结果的，至少大差不差的。 若严格按照别的protocol做了，但结果有差异，想必一些环节没有注意： 1.细胞计数不够准确（当然了，现行的方法只有更准确，没有最准确），铺板细胞数目难以接近protocol里的；建议买个好点的全自动计数器； 2.细胞培养基需用无血清、去激素、无酚红的吧； 3.铺板或E2暴露之前应该要48h左右的无血清无激素培养基饥饿培养，暴露时间要控制好； 4.板子：最好用全黑板（减少假阳性），全白板最为常用；尽量不用壁不透明而底透明的板子； 5.仪器：用的检测仪器会影响结果的。promega的仪器最好且最灵敏（背景值可减去）；Berthold的专门测化学发光的也可以【以上仪器我都用过，并比较过的】；但是诸如MD的M5就差很多了，因为其检测模块设计不专业，不能准确记录各孔数据，孔间干扰显著！总之，专业的单纯检测化学发光的仪器应该都可以的。 6.提示，不论阳性还是阴性对照，坚决不能少！ 多思考一下做的每个环节，推测一下，应该会找到问题的。 祝你实验顺利！ 顺便问一句：此细胞株可否相赠或转卖？ |
7楼2012-04-03 16:07:42
addison7805
金虫 (小有名气)
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2楼2012-03-27 20:13:44
addison7805
金虫 (小有名气)
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4楼2012-04-01 21:23:52
5楼2012-04-03 10:30:47
