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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教定点突变的突变点如何选取
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wzp9012

铁虫 (著名写手)

[求助] 请教定点突变的突变点如何选取

本人接下来要做定点突变实验，但对于突变点的选择上不太明白，有没有做过类似实验的师兄师姐，望帮帮忙，告知些突变点的选择方法
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1楼 2013-05-13 15:28:42
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-05-15 01:17:10
wzp9012: 金币+5 2013-05-17 17:32:13
楼主给你信息不太够. 你的问题是不是要问怎么选要改的地方?
我想问的是, 你要改的是蛋白的序列看对功能的影响还是改启动子什么的看对基因表达的影响?
如果是前者你一般需要参考对这个蛋白已经发表的文献来猜测那些氨基酸对蛋白的功能有决定性影响, 如果是后者你需要做一些前期工作大致地定位控制基因表达的motif. 有了这些信息才好知道需要改的序列在哪里, 也才能相应的设计引物.
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2楼2013-05-13 15:50:49
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wzp9012

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-13 15:50:49
楼主给你信息不太够. 你的问题是不是要问怎么选要改的地方?
我想问的是, 你要改的是蛋白的序列看对功能的影响还是改启动子什么的看对基因表达的影响?
如果是前者你一般需要参考对这个蛋白已经发表的文献来猜测那 ...

嗯，就是想知道要突变的碱基位点如何选取得，新手，太多的地方不了解，谢谢你的提醒，见谅。主要目的是提高酶的活性和热稳定性。是不是要通过模型分析呢
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3楼2013-05-16 15:56:01
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wzp9012 at 2013-05-16 15:56:01
嗯，就是想知道要突变的碱基位点如何选取得，新手，太多的地方不了解，谢谢你的提醒，见谅。主要目的是提高酶的活性和热稳定性。是不是要通过模型分析呢...

楼主原来要提高酶的功能啊, 这个我建议用盲选的办法, 就是分子进化法. 楼主先建立一个高通量的酶功能检测系统, 然后用易错PCR(error-prone PCR)产生大量的随即突变, 然后用你的系统去筛.
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4楼2013-05-16 16:14:25
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