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DNA洗涤沉淀
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（一）DNA和载体经T4 Ligase连接以后要进行电转化，所以连接体系要纯化，步骤如下： (1)加入2.5 μl（1/10量）的3 M CH3COONa（pH5.2）。 (2)加入62.5 μl（2.5倍量）的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。 (3)离心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 (4)25～50 μl TE溶解，10～20 μl转化至100 μl的感受态细胞中。 之前做了几次连接和电转化，都没有成功，阳性对照转化了，阴性对照没转化，连接产物也没转化，估计洗涤沉淀过程中把连接产物连同上层溶液一起倒掉去除。（电转化过程中的放电时间一般介于4~5ms左右，但是连接产物的放电时间跟上述时间有较大差异，相差2个数量级）。 请问，第(3)步中，离心回收沉淀，由于DNA用肉眼根本看不到，怎样保证弃去上层溶液的时候不会把管底的DNA沉淀一起倒掉啊？求具体的操作要点！ （二）分布双酶切的具体步骤是什么？切完一个之后用什么方法纯化？纯化试剂盒还是和上述（一）所提到的洗涤沉淀？ |
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cicelyzh
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