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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 急，最近PCR实验，目标条带总比预期的大70bp左右，请问是怎么回事啊？
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bshark

铜虫 (初入文坛)

[求助] 急，最近PCR实验，目标条带总比预期的大70bp左右，请问是怎么回事啊？

我的引物是yqiL-Up        CAGCATACAGGACACCTATTGGC
                  yqiL-Dn        CGTTGAGGAATCGATACTGGAAC
目标跳带是516，然后总是跑到575左右，因为要做mlst分型，对基因的长度要求很精确，请问是怎么回事啊，各位大侠！！
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1楼 2013-04-26 18:57:28
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这么精准的跑胶，为什么不测序看看呢？
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一花一世界、一叶一菩提
2楼2013-04-26 19:16:41
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bshark

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乐乐3952 at 2013-04-26 19:16:41
这么精准的跑胶，为什么不测序看看呢？

已近测序
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3楼2013-04-26 19:22:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by bshark at 2013-04-26 19:22:01
已近测序...

胶上看分子量不是很准确，有时候会出现表观分子量与实际值差得比较多的情况。以测序结果为准。
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4楼2013-04-27 09:00:27
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susan小水

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我想知道你用的是什么染料，如果是sybr green1的话，他与双链dna结合，会使条带往后跑，这是很正常的，不用担心。若要精确根据marker 知道长度，建议换一种染料，EB或者什么，有很多选择。发文章时根据sybr看长度的做法都是不认可的。。。
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原谅我一生，放纵不羁爱自由
5楼2013-08-18 10:58:27
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