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请教cDNA-AFLP的定量问题
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我在做cDNA-AFLP，反转录用的TAKARA的试剂盒要求加2μg Template RNA，而mRNA只占Total RNA的不到1~4%，纯化用的Promega的试剂盒纯化效率好像也不是很高。我现在需要定量cDNA。所以想请教： 1.如果反转录加2μg，我第一步提的Total RNA定量应该多少？是按mRNA的含量算要50~200μg吗？不靠谱吧？ 2.如果RNA没定量，cDNA怎么定量？含量太少了，除了测定吸光度值，有更好的方法吗？ 3.非要测吸光度值的话，和RNA一样测OD260/OD280吗？浓度计算公式也是一样的吗？ 没有在做cDNA-AFLP的吗？还是我这问题不值得回答？ 求赐教~~~！！！  谢谢 [ Last edited by sys0610 on 2013-5-10 at 15:27 ] |
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